1樓：中國農業出版社
（1）斜面低溫保藏 常用的方法是採用pda培養基或糞草料試管，在4℃的穩定低溫容器中保藏，每2～3個月繁殖一次；也有采用同樣的低溫條件，但培養基是麥粒培養基，6個月更換一次。
（2）液氮保藏 在從-196℃的溫度下取出或進入－196℃溫度保藏的過程中，嚴格按照液氮保藏有關條件和程式處理受保藏或將取出使用的蘑菇菌株，防止在保藏或取出處理過程使菌株受傷害。
保藏菌種的方法有哪些？
2樓：匿名使用者
1、傳代培養
保藏法：包括又有斜面培養、穿刺培養、皰肉培養基培養等，培養後於4-6℃冰箱內儲存。
2、液體石蠟覆蓋保藏法：液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養的變相方法，能夠適當延長保藏時間。
3、載體保藏法：載體保藏法是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、矽膠、濾紙上，而後進行乾燥的保藏法。
4、寄主保藏法：寄主保藏法用於目前尚不能在人工培養基上生長的微生物。
5、冷凍乾燥保藏法：先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然後在減壓下利用昇華現象除去水分（真空乾燥），其中真空冷凍乾燥法最常見。
菌種保藏的原理：
菌種保藏有多種方法，其原理大多大同小異，主要是運用一些方式儘量降低生物體內的代謝，達到延長生命，減少變異的目的。通常採用的方法為低溫、缺氧、乾燥。
低溫主要對菌種產生兩方面的影響，首先，較低的溫度可以減緩機體細胞的酶活，降低新陳代謝，達到保藏菌種的目的。其次，低溫同時會導致菌體誘發菌絲自溶機制，如果降溫過程失誤，同樣會造成機體的機械損傷和溶質損傷。
3樓：中國農業出版社
（1）斜面低溫保藏 常用的方法是採用pda培養基試管，在1～4℃的穩定低溫容器中保藏，每3～4個月繁殖一次；也有采用同樣的低溫條件，但培養基是木屑麥皮培養基，一年更換一次。
（2）液氮保藏 在從-196℃的溫度下取出或進入-196℃溫度保藏的過程中，嚴格按照液氮保藏的有關條件和程式處理受保藏或將取出使用的香菇菌株，防止在保藏或取出的處理過程中使菌株受傷害。
4樓：匿名使用者
一、菌種保藏
（一）、菌種保藏的目的
微生物在使用和傳代過程中容易發生汙染、變異甚至死亡，因而常常造成菌種的衰退，並有可能使優良菌種丟失。菌種保藏的重要意義就在於儘可能保持其原有性狀和活力的穩定，確保菌種不死亡、不變異、不被汙染，以達到便於研究、交換和使用等諸方面的需要。
（二）、菌種保藏的原理
無論採用何種保藏方法，首先應該挑選典型菌種的優良純種來進行保藏，最好保藏它們的休眠體，如分生孢子、芽孢等。其次，應根據微生物生理、生化特點，人為地創造環境條件，使微生物長期處於代謝不活潑、生長繁殖受抑制的休眠狀態。這些人工造成的環境主要是乾燥、低溫和缺氧，另外，避光、缺乏營養、新增保護劑或酸度中和劑也能有效提高保藏效果。
（三）、菌種保藏的方法
1、斜面低溫保藏法
將菌種接種在適宜的斜面培養基上，待菌種生長完全後，置於4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定時間（保藏期）再轉接至新的斜面培養基上，生長後繼續保藏，如此連續不斷。此法廣泛適用於細菌、放線菌、酵母菌和黴菌等大多數微生物菌種的短期保藏及不宜用冷凍乾燥保藏的菌種。放線菌、黴菌和有芽孢的細菌一般可儲存6個月左右，無芽孢的細菌可儲存1個月左右，酵母菌可儲存3個月左右。
如以橡皮塞代替棉塞，再用石蠟封口，置於4℃冰箱中保藏，不僅能防止水分揮發、能隔氧，而且能防止棉塞受潮而汙染。這一改進可使菌種的保藏期延長。
該法的優點是簡便易行，容易推廣，存活率高，故科研和生產上對經常使用的菌種大多采用這種保藏方法。其缺點是菌株仍有一定程度的代謝活動能力，保藏期短，傳代次數多，菌種較容易發生變異和被汙染。
2、石蠟油封藏法
此法是在無菌條件下，將滅過菌並已蒸發掉水分的液體石蠟倒入培養成熟的菌種斜面（或半固體穿刺培養物）上，石蠟油層高出斜面頂端lcm，使培養物與空氣隔絕，加膠塞並用固體石蠟封口後，垂直放在室溫或4℃冰箱內保藏。使用的液體石蠟要求優質無毒，化學純規格，其滅菌條件是：150～170℃烘箱內滅菌lh；或121℃高壓蒸汽滅菌60～80min，再置於80℃的烘箱內烘乾除去水分。
由於液體石蠟阻隔了空氣，使菌體處於缺氧狀態下，而且又防止了水分揮發，使培養物不會乾裂，因而能使保藏期達1～2年，或更長。這種方法操作簡單，它適於保藏黴菌、酵母菌、放線菌、好氧性細菌等，對黴菌和酵母菌的保藏效果較好，可儲存幾年，甚至長達10年。但對很多厭氧性細菌的保藏效果較差，尤其不適用於某些能分解烴類的菌種。
3、砂土管保藏法
這是一種常用的長期保藏菌種的方法，適用於產孢子的放線菌、黴菌及形成芽孢的細菌，對於一些對乾燥敏感的細菌如奈氏球菌、弧菌和假單胞桿菌及酵母則不適用。
其製作方法是，先將砂與土分別洗淨、烘乾、過篩(一般砂用60目篩，土用120目篩)，按砂與土的比例為(1～2)：1混勻，分裝於小試管中，砂土的高度約1cm，以121℃蒸汽滅菌1～1.5h，間歇滅菌3次。
50℃烘乾後經檢查無誤後備用。也有隻用砂或土作載體進行保藏的。需要保藏的菌株先用斜面培養基充分培養，再以無菌水製成108～1010個/ml菌懸液或孢子懸液滴入砂土管中，放線菌和黴菌也可直接刮下孢子與載體混勻，而後置於乾燥器中抽真空約2～4h，用火焰熔封管口(或用石蠟封口)，置於乾燥器中，在室溫或4℃冰箱內保藏，後者效果更好。
砂土管法兼具低溫、乾燥、隔氧和無營養物等諸條件，故保藏期較長、效果較好，且微生物移接方便，經濟簡便。它比石蠟油封藏法的保藏期長，約1～10年。中國科學院微生物研究所用砂土管保藏法保藏放線菌。
4、麩皮保藏法
麩皮保藏法亦稱曲法保藏。即以麩皮作載體，吸附接入的孢子，然後在低溫乾燥條件下儲存。其製作方法是按照不同菌種對水分要求的不同將麩皮與水以一定的比例1：
(0.8～1.5)拌勻，裝量為試管體積2/5，溼熱滅菌後經冷卻，接入新鮮培養的菌種，適溫培養至孢子長成。
將試管置於盛有氯化鈣等乾燥劑的乾燥器中，於室溫下乾燥數日後移入低溫下保藏；乾燥後也可將試管用火焰熔封，再保藏，則效果更好。
此法適用於產孢子的黴菌和某些放線菌，保藏期在1年以上。因操作簡單，經濟實惠，工廠較多采用。中國科學院微生物研究所採用麩皮保藏法保藏麴黴，如米麴黴、黑麴黴、泡盛麴黴等，其保藏期可達數年至數十年。
5、冷凍真空乾燥保藏法
冷凍真空乾燥保藏法又稱冷凍乾燥保藏法，簡稱凍幹法。它通常是用保護劑製備擬保藏菌種的細胞懸液或孢子懸液於安瓿管中，再在低溫下快速將含菌樣凍結，並減壓抽真空，使水昇華將樣品脫水乾燥，形成完全乾燥的固體菌塊。並在真空條件下立即融封，造成無氧真空環境，最後置於低溫下，使微生物處於休眠狀態，而得以長期保藏。
常用的保護劑有脫脂牛奶、血清、澱粉、葡聚糖等高分子物質。
由於此法同時具備低溫、乾燥、缺氧的菌種保藏條件，因此保藏期長，一般達5～15年，存活率高，變異率低，是目前被廣泛採用的一種較理想的保藏方法。除不產孢子的絲狀真菌不宜用此法外，其他大多數微生物如病毒、細菌、放線菌、酵母菌、絲狀真菌等均可採用這種保藏方法。但該法操作比較煩瑣，技術要求較高，且需要凍幹機等裝置。
保藏菌種需用時，可在無菌環境下開啟安瓿管，將無菌的培養基注入安瓿管中，固體菌塊溶解後，搖勻覆水，然後將其接種於適宜該菌種生長的斜面上適溫培養即可。
6、液氮超低溫保藏法
液氮超低溫保藏法簡稱液氮保藏法或液氮法。它是以甘油、二甲基亞碸等作為保護劑，在液氮超低溫（-196℃）下保藏的方法。其主要原理是菌種細胞從常溫過渡到低溫，並在降到低溫之前，使細胞內的自由水通過細胞膜外滲出來，以免膜內因自由水凝結成冰晶而使細胞損傷。
美國atcc菌種保藏中心採用該法時，把菌懸液或帶菌絲的瓊脂塊經控制致冷速度，以每分鐘下降1℃/min 的速度從0℃直降到-35℃，然後保藏在-150℃～-196℃液氮冷箱中。如果降溫速度過快，由於細胞內自由水來不及滲出胞外，形成冰晶就會損傷細胞。據研究認為降溫的速度控制在(1～10)℃/min，細胞死亡率低；隨著速度加快，死亡率則相應提高。
液氮低溫保藏的保護劑，一般是選擇甘油、二甲基亞碸、糊精、血清蛋白、聚乙烯氮戊環、吐溫80等，但最常用的是甘油（10%～20%）。不同微生物要選擇不同的保護劑，再通過試驗加以確定保護劑的濃度，原則上是控制在不足以造成微生物致死的濃度。
此法操作簡便、高效、保藏期一般可達到15年以上，是目前被公認的最有效的菌種長期保藏技術之一。除了少數對低溫損傷敏感的微生物外，該法適用於各種微生物菌種的保藏，甚至連藻類、原生動物、支原體等都能用此法獲得有效的保藏。此法的另一大優點是可使用各種培養形式的微生物進行保藏，無論是孢子或菌體、液體培養物或固體培養物均可採用該保藏法。
其缺點是需購置超低溫液氮裝置，且液氮消耗較多，操作費用較高。
要使用菌種時，從液氮罐中取出安瓿瓶，並迅速放到35～40℃溫水中，使之冰凍熔化，以無菌操作開啟安瓿瓶，移接到保藏前使用的同一種培養基斜面上進行培養。從液氮罐中取出安瓿瓶時速度要快，一般不超過1min，以防其他安瓿瓶升溫而影響保藏質量。並且取樣時一定要戴專用手套以防止意外**和凍傷。
（四）、目前國內外主要菌種保藏機構
表8－1 國內主要菌種保藏機構
單位簡稱 單 位 名 稱 單位簡稱 單 位 名 稱
ccccm 中國微生物菌種保藏管理委員會 nicpbp 衛生部藥品生物製品檢定所
cgmcc 中國普通微生物菌種保藏中心 － 中國預防醫學科學院病毒研究所
as 中國科學院微生物研究所 cacc 中國抗生素微生物菌種保藏中心
as-iv 中國科學院武漢病毒研究所 iem 中國醫學科學院醫學生物學研究所
accc 中國農業微生物菌種保藏中心 sia 四川抗生素研究所
isf 中國農業科學院土壤與肥料研究所 ianp 石家莊華北製藥廠抗生素研究所
cicc 中國工業微生物菌種保藏中心 cvcc 中國獸醫微生物菌種保藏中心
iffi 中國食品發酵工業研究院 ncivbp 農業部獸藥監察研究所
cmcc 中國醫學微生物菌種保藏中心 cfcc 中國林業微生物菌種保藏中心
id 中國醫學科學院**病研究所 rif 中國林業科學院林業研究所
表8－2 國外部分菌種保藏機構
單位簡稱 單位名稱 單位簡稱 單位名稱
atcc 美國典型培養物收藏中心 nctc 國家典型菌種保藏中心（英國）
nrrl 北方開發利用研究部（美國） iam 東京大學應用微生物研究所(日本)
cbs 黴菌中心保藏所（荷蘭） cctm 法國典型微生物保藏中心
ncib 英國國立工業細菌菌庫 cmi 英聯邦真菌研究所
ifo 大阪發酵研究所（日本） ssi 國立血清研究所
atcc 美國典型培養物收藏中心 who 世界衛生組織
手工鋸鋸條的正確實用方法，是鋸齒朝上還是鋸齒朝下
安裝方法鋸齒朝前，手握部分為後沒有上下之分，因為你工作時是俯身或仰面不能確定。1 根據鋼鋸的不同形狀和鋸削不同材料來安裝鋼鋸條。通常鋼鋸條的鋸齒是朝鋼鋸的前端。鋸條安裝方向都是齒尖向著鋸子推出去的前方。2 用力向前推動鋸子時，鋸齒能切入工件中，弧度的那一面，因為要向前切削，如果斜的那面向前切削刃角度...
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