1樓：我痛得多漂亮
蛋白提取時使用蛋白裂解液將細胞裂解，然後離心分為上清液和下層沉澱，如果你說的是這個上清液的話，那麼這個上清液是細胞中的可溶性蛋白，一般包括細胞質的蛋白和細胞核的可溶性蛋白，下層沉澱主要是細胞碎片以及不可溶的蛋白以及染色質之類的。
請教：用培養的細胞做western
2樓：匿名使用者
做western blot需要多少細胞並不是一個固定的值這主要取決於蛋白的表達量，沒有一個絕對的量如果做細胞總蛋白的話，至少10的4次方細胞每微升蛋白裂解液。一般可以每泳道取10的5次方細胞每微升蛋白裂解液（即10微升上樣）
根據這個數量級，結合western blot結果進行調整即可確認做western blot需要多少細胞
如何提細胞的組蛋白做western blot？
3樓：
你的意思就是提取核蛋白，提取核蛋白和提取全蛋白用的裂解液是不一樣的。一般情況下我們都是買試劑盒，裡面包含有細胞裂解液和核裂解液，按照說明書實用就行了。
1 20mmol/l的hepe（ph 7.9）2 420mmol/l nacl
3 1.5mmol/l mgcl2
4 2%igepal
5 0.5mmo/l edta
6 20%甘油
7 1mmol/l dtt
8 0.25mmol/l pmsf
9 5ug/ml aprotinin
10 5ug/ml pepstatin
11 5ug/ml leupeptin
或者你可以按照這個配，這個是細胞核裂解液。
做法就是，你按順序提了全蛋白以後把上清棄掉，在沉澱中加入這個核裂解液，**然後離心，此時上清就是核蛋白了。
4樓：匿名使用者
通過有機溶劑或水溶法制備總蛋白
水溶液提取法
針對水、稀鹽、稀酸或鹼溶液中的蛋白質。稀鹽和緩衝系統的水溶液
對蛋白質穩定性好、溶解度大、是提取蛋白質最常用的溶劑 。
細胞裂解液： 50 mmol/l tris-hcl, 150 mmol/l nacl ,5 mmol/l edta, 1%np40 ， 0.05% pmsf ， 2μg/ml aprotinin, 0.
5μg/ml leupeptin ， ph8.0
有機溶劑提取法
對於分子中非極性側鏈較多的蛋白質可用有機溶劑提取，包括乙醇、
丙酮和丁醇等。
通過層析或電洗脫法制備目的蛋白
bradford法
考馬斯亮藍g-250有紅、藍兩種不同顏色的形式，在一定濃度的乙醇和酸性條件下，可配成淡紅色的溶液，與蛋白結合後形成藍色化合物，該化合物在595nm處有最大吸收值，化合物顏色深淺與蛋白的濃度高低成正比 。(上樣量)
試劑：考馬斯亮藍工作液，0.1n鹽酸，雙蒸水，蛋白標準液（ 將10mg/ml蛋白溶液稀釋至4.
0mg/ml, 3.5mg/ml, 3.0mg/ml, 2.
5mg/ml, 2.0mg/ml, 1.5mg/ml, 1.
0mg/ml, 0.5mg/ml。）
sds 是一種離子性的介面活性劑,它有強離子性的硫酸根離子也帶有疏水
性的長碳鏈.當 sds 與蛋白質混合時,它會以其碳鏈與蛋白質之疏水性胺
基酸結合將蛋白質包起來,而以硫酸根離子外露與水分子作用.大多數蛋
白質和 sds 的平均結合量是 1:1.4 (以重量為單位),而蛋白質結合固定
比例之 sds 後,由於 sds 帶強負價,使蛋白質原先的帶電價微不足道,且
每單位重量之蛋白質帶電價一致 (charge density),所以決定不同蛋白的泳動速率就只剩下分子大小一項因素
把硝酸纖維素濾膜放在密閉塑料袋或者培養皿中，根據濾膜面積以0.1ml/cm2的量加入加入一抗溶液與濾膜溫育。37℃一小時，4 ℃過夜。
倒掉一抗溶液，用pbs漂洗液濾膜3次，每次10min。
加入用封閉液配製的二抗，搖床上緩慢搖動， 37℃一小時，4 ℃過夜。
倒掉一抗溶液，用pbs漂洗液濾膜3次，每次10min
5樓：匿名使用者
差速離心先分離出細胞核，然後可以抽總核蛋白做wb。錢多的話有專門的試劑盒提組蛋白的。
6樓：
幹嘛非要提組蛋白呢？直接提取細胞總蛋白，然後用組蛋白的抗體檢測就是了，裂解液就用一般的就是了
WB實驗時,細胞裂解液如何配置
組織裂解液 全細胞蛋提取 1 tris hcl 50mmol l ph 7.42 nacl 150 mmol l 3 去氧膽酸鈉 0.25 4 np 40或triton x 100 1 5 edta 1 mmol l 6 pmsf 1 mmol l 7 aprotinin 1 g ml 8 leup...
怎樣做水煮魚，如何做水煮魚？
主料 草魚 黃豆芽 輔料 雞蛋清 姜 蒜 郫縣豆瓣醬 辣椒若干 花椒適量 鹽 澱粉 料酒1.材料 草魚 黃豆芽 調味 雞蛋清 姜 蒜 郫縣豆瓣醬 辣椒若干 花椒適量 鹽 澱粉 料酒。2.將草魚去腮 內臟處理乾淨。3.切下頭 尾留用，沿中間魚骨將魚肉片成兩片。4.魚皮朝下，斜刀切除魚身的大刺片，再切成...
水煮魚應該怎樣做？如何做水煮魚？
材料 草魚1條，黃豆芽，金針菇適量，蔥，姜，花椒，幹辣椒，豆瓣醬，鹽，雞精，料酒，蒜。做法 1.草魚一條，我買的只有斤，去鱗，鰓和內臟，洗淨。然後將魚頭剁下，並從中分兩半，將魚身平放用鋒利的刀平著將兩大片魚肉和魚排分開，繼續將兩大片魚肉片成適量的魚片，將魚排分為三四段與魚頭放一起備用。2.在魚片內放...