請問什麼叫QPCR,請問實驗室的常用技術PCR,qPCR,rtPCR,western blot 分別是為了什麼目的進行的實驗?

2021-08-11 09:31:44 字數 1438 閱讀 1595

1樓:扶雅利

聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction簡稱pcr)原理憑藉敏感、特異、快速的特點榮獲2023年諾貝爾化學獎。因其在病原體檢測方面的獨特優勢,因而發達國家在相關方法和儀器方面的研發非常快,成為分子生物學診斷的主流,至今仍處於學術和應用前沿,發展至今已有三代產品:第一代pcr定性檢測技術及裝置由基因擴增熱迴圈儀(dna thermal cycler)+電泳儀+紫外分析儀+定性試劑構成;第二代pcr-dna終點定量技術及裝置(end-point quantitative pcr detection)由基因擴增熱迴圈儀+熒光儀+終點定量試劑構成,其又分為終點酶免定量(end-point elisa-pcr)和終點熒光定量(end-point flour-pcr)兩種;第三代產品為qpcr-dna/rna實時熒光定量檢測。

qpcr檢測靈敏度高,檢測線性範圍寬,檢測精度和重複性好等突出優勢,因此被公認為當今世界用於臨床的最先進核酸分子診斷技術,被美國fda承認並推崇。被美國fda批准並取得臨床應用執照的qpcr試劑品種有:乙肝病毒hbv dna,丙肝病毒hcv rna,艾滋病病毒hiv rna,沙眼衣原體ct,淋病雙球菌ng,鉅細胞病毒cmv,結核分支桿菌mtb等。

實時熒光pcr儀研發技術難度大,門檻高,發達國家也只有有限幾家知名公司生產,且售價昂貴,在50-120萬元。 可見,在病人看來,****應用了qpcr技術便是先進診斷技術的象徵,在發達國家也是如此。參考資料:

請問實驗室的常用技術pcr,qpcr,rtpcr,western blot 分別是為了什麼目的進行的實驗?

2樓:匿名使用者

pcr 常用就是擴基因,提完rna後反轉啊,那你擴來基因用做什麼就需要你來看了。

菌落pcr,也是擴,放大數目,好驗證。

qpcr是熒光染料,做定量,一般是看錶達,就是基因的表達情況,基因層面

rtpcr是半定量,相對上面的定量來說沒有完全量化,相當於是質化,也能看出問題

western 是做蛋白的

請教下大神,實時定量pcr(qpcr)實驗,看擴增曲線的意義是什麼?

3樓:科研高手

你好,擴增曲線可以粗略地判斷擴增效

率。sybr green的雙delta ct法要求目的基因和內參的擴增效率基本一致。如果不一致,需要對公式進行修正,部分qpcr儀的配套軟體可以做到,直接輸入每對引物的擴增效率。

但無論如何,保證高擴增效率是實驗成功的關鍵。如果擴增效率一致,不同ct的曲線顯示出來就基本是平行的位移,其傾斜程度基本一致。而如下圖一樣,一條比較“陡”,另一條比較“平”,那麼意味著擴增效率不一致。

有可能是引物效率不一,或者個別樣品、反應孔存在抑制pcr的汙染等。

來自:肽度時界威客吳博士,有科研難題、科研需求就上肽度時界吧!

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