流式細胞儀檢測細胞凋亡結果該怎樣分析

2021-04-01 11:15:59 字數 1721 閱讀 5974

1樓:憕

已經做完流

bai式,看到結果卻不知該怎du樣分析了zhi。我用的是annexinv-fitc 凋亡試劑盒 ,daoannexinv/pi雙染檢測細版胞凋亡。請教各位權,凋亡散點圖中第1,2,4象限到底分別代表什麼細胞?

手裡的資料說法都不相同。試劑盒說明書:1代表細胞收集過程中機械性損傷的細胞,2 代表繼發性壞死細胞,4代表凋亡細胞。

有資料說:1代表壞死細胞,2代表晚期凋亡細胞,4代表早期凋亡細胞。我就不明白了,既然是凋亡,就算是晚期,細胞膜也會破壞?

還有的認為,2象限代表晚期凋亡和繼發性壞死的細胞。

我用的是美國beckman-coulter公司試劑盒,它的說明說上就是這麼寫的:

quadrant 3:viable cellsquadrant 4:apoptotic cellsquadrant 2:secondary necrotic cells

這種說法在園子裡還沒見過。

應該以說明書為準嗎?我很迷茫。請您指點。

流式細胞儀細胞凋亡的結果怎麼分析

2樓:匿名使用者

流式檢測凋亡的方法有好多種,你用的是那個方法呢?

請問流式細胞儀檢測細胞凋亡的原理是什麼?

3樓:匿名使用者

一、原理

在正常細胞中,磷脂醯絲氨酸(ps)只分布在細胞膜脂質雙層的內側,而在細胞凋亡早期,細胞膜中的磷脂醯絲氨酸(ps)由脂膜內側翻向外側。annexin v是一種分子量為35~36kd的ca2+依賴性磷脂結合蛋白,與磷脂醯絲氨酸有高度親和力,故可通過細胞外側暴露的磷脂醯絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此annexin v被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。

將annexin v進行熒光素(egfp、fitc)標記,以標記了的annexin v作為熒光探針,利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發生。

碘化丙啶(propidium iodide, pi)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但對凋亡中晚期的細胞和死細胞,pi能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將annexin v與pi匹配使用,就可以將處於不同凋亡時期的細胞區分開來。

二、注意事項

1、必須活細胞檢測,不能用能破壞細胞膜完整性的固定劑和穿透劑固定或穿膜。

2、特殊細胞的染色方法:在消化或吹打時,有些細胞(如神經元細胞)很容易受到損傷,導致晚期凋亡或壞死比例非常高,不能反映真實結果。實驗的解決方法:

先低速離心,吸取細胞培養板中的液體,留少許液體,加入適量pi和annexin-v染色10min後,將漂浮細胞吸至離心管中,離心洗滌兩次,用pbs漂洗貼壁細胞兩次,加胰酶消化後將細胞懸液移至另一離心管中,離心洗滌,再與漂浮細胞合併後上流式細胞儀檢測。應用該法可降低晚期凋亡和壞死比例,增加早期凋亡細胞比例。

3、由於annexin-v為鈣離子依賴的磷脂結合蛋白,只有在鈣離子存在的情況下與ps的親和力才大,因而在消化細胞時,建議一般不採用含edta的消化液。

4、必須設定陰性對照和補償對照(分別單染)。

4樓:匿名使用者

最常用的是annexinv /pi雙染檢測凋亡,凋亡的細胞膜上的ps(磷脂醯絲氨酸蛋白)會從膜內轉移到膜外,我們利用annexinv抗體即可與之結合,有結和得說明這個細胞有凋亡,pi是用來區分死活細胞的,一般認為annexinv陽性,pi陰性的那群細胞即為早期凋亡細胞。

pi染色流式細胞儀結果圖分析,只是看細胞凋亡,多謝

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