1樓：匿名使用者
流式檢測ros的特異性比較差。一般來說，針對過氧化氫和超氧化物有熒光探針。加到細胞培養液後，細胞攝齲遇到ros，可以發出熒光，上機檢測可以比較各組之間熒光強度的變化從而代表ros水平的不同。
你這個圖橫座標代表的是相對熒光強度，縱座標代表的是細胞計數。 圖的含義就是在每個熒光強度有多少細胞。 估計你用了氧化敏感的熒光指標，ros反應後熒光增加。
所以你應該先用對照組設一個閾值，看實驗組的熒光強度有沒有高於或者低於該閾值。
流式細胞儀檢測細胞ros直接測的是哪些資料
2樓：匿名使用者
某些熒光染料可以相對特異的被超氧化物或者過氧化物激發，產生熒光。通過比較不同樣板的熒光強度的高低，可以比較樣板間相對的ros濃度。不過這些檢測的特異性不是很強
流式細胞術測ros圖譜怎麼分析
3樓：匿名使用者
ros的流式檢測
活性氧檢測試劑盒（reactive oxygen species assay kit）是一種利用熒光探針dcfh-da進行活性氧檢測的試劑盒。dcfh-da本身沒有熒光，可以自由穿過細胞膜，進入細胞內後，可以被細胞內的酯酶水解生成dcfh。而dcfh不能通透細胞膜，從而使探針很容易被裝載到細胞內。
細胞內的活性氧可以氧化無熒光的dcfh生成有熒光的dcf。檢測dcf的熒光就可以知道細胞內活性氧的水平。 本試劑盒提供了活性氧陽性對照試劑rosup以便於活性氧的檢測。
rosup是一種混合物（***pound mixture），濃度為50mg/ml。
一、注意事項
1、探針裝載後，一定要洗淨殘餘的未進入細胞內的探針，否則會導致背景較高。
2、探針裝載完畢並洗淨殘餘探針後，可以進行激發波長的掃描和發射波長的掃描，以確認探針的裝載情況是否良好。
3、儘量縮短探針裝載後到測定所用的時間（刺激時間除外），以減少各種可能的誤差。
4、為了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。
二、使用說明
1、裝載探針
對於刺激時間較短（通常為2小時以內）的細胞，先裝載探針，後用活性氧陽性對照及自己感興趣的藥物刺激細胞。對於細胞刺激
時間較長（通常為6小時以上）的細胞，先用活性氧陽性對照及自己感興趣的藥物刺激細胞，後裝載探針。
原位裝載探針：本方法僅適用於貼壁培養細胞。按照1：
1000用無血清培養液稀釋dcfh-da，使終濃度為10微摩爾/升。去除細胞培養液，加入適當體積稀釋好的dcfh-da。加入的體積以能充分蓋住細胞為宜，通常對於六孔板的一個孔加入稀釋好的dcfh-da的體積為1毫升。
37℃細胞培養箱內孵育20分鐘。用無血清細胞培養液洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內的dcfh-da。
通常活性氧陽性對照在刺激細胞20-30分鐘後可以顯著提高活性氧水平。
收集細胞後裝載探針：按照1：1000用無血清培養液稀釋dcfh-da，使終濃度為10微摩爾/升。
細胞收集後懸浮於稀釋好的dcfh-da中，細胞濃度為一百萬至二千萬/毫升，37℃細胞培養箱內孵育20分鐘。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下，使探針和細胞充分接觸。用無血清細胞培養液洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內的dcfh-da。
直接用活性氧陽性對照及自己感興趣的藥物刺激細胞，或把細胞等分成若干份後刺激細胞。通常活性氧陽性對照在刺激細胞20-30分鐘後可以顯著提高活性氧水平。
2.、檢測
對於原位裝載探針的樣品可以用鐳射共聚焦顯微鏡直接觀察，或收集細胞後用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測。
對於收集細胞後裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測，用鐳射共聚焦顯微鏡直接觀察也可以。
3、引數設定
使用488nm激發波長，525nm發射波長，實時或逐時間點檢測刺激前後熒光的強弱。dcf的熒光光譜和fitc非常相似，可以用fitc的引數設定檢測dcf。
4、其它說明
陽性對照可以按照1：1000的比例使用。例如裝載好探針的細胞共1毫升，可以加入1微升的陽性對照刺激。
通常刺激後20-30分鐘內可以觀察到非常顯著的活性氧水平升高。對於不同的細胞，活性氧陽性對照的效果可能有較大的差別。如果在刺激後30分鐘內觀察不到活性氧的升高，可以適當提高活性氧陽性對照的濃度。
如果活性氧升高得過快，可以適當降低活性氧陽性對照的濃度。
另外，對於某些細胞，如果發現沒有刺激的陰性對照細胞熒光也比較強，可以按照1：2000-1：5000稀釋dcfh-da，使裝載探針時dcfh-da的濃度為2-5微摩爾/升。
探針裝載的時間也可以根據情況在15-60分鐘內適當進行調整。
用bd的流式細胞儀檢測ros的熒光強度，結果怎麼分析呢，橫縱座標都代表什麼呢，不會分析呀。
4樓：匿名使用者
你這個圖橫座標代表的是相對熒光強度，縱座標代表的是細胞計數。
圖的含義就是在每個熒光強度有多少細胞。
估計你用了氧化敏感的熒光指標，ros反應後熒光增加。所以你應該先用對照組設一個閾值，看實驗組的熒光強度有沒有高於或者低於該閾值。
怎麼用流式細胞儀檢測hela細胞內的ca2+
5樓：匿名使用者
檢測細胞內的鈣離子的變化，可以用鈣敏感的熒光染料。比如下圖的這個結果，就是細胞用indo-1鈣敏感染料先染色，然後刺激，可以看到熒光強度變化
怎麼用流式細胞儀檢測hela細胞內的
檢測細胞內的鈣離子的變化，可以用鈣敏感的熒光染料。比如下圖的這個結果，就是細胞用indo 1鈣敏感染料先染色，然後刺激，可以看到熒光強度變化 如何用流式細胞儀檢測細胞內的ros 流式檢測ros的特異性比較差。一般來說，針對過氧化氫和超氧化物有熒光探針。加到細胞培養液後，細胞攝齲遇到ros，可以發出熒...
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