1樓：匿名使用者
檢測細胞內的鈣離子的變化，可以用鈣敏感的熒光染料。比如下圖的這個結果，就是細胞用indo-1鈣敏感染料先染色，然後刺激，可以看到熒光強度變化
如何用流式細胞儀檢測細胞內的ros
2樓：匿名使用者
流式檢測ros的特異性比較差。一般來說，針對過氧化氫和超氧化物有熒光探針。加到細胞培養液後，細胞攝齲遇到ros，可以發出熒光，上機檢測可以比較各組之間熒光強度的變化從而代表ros水平的不同。
你這個圖橫座標代表的是相對熒光強度，縱座標代表的是細胞計數。 圖的含義就是在每個熒光強度有多少細胞。 估計你用了氧化敏感的熒光指標，ros反應後熒光增加。
所以你應該先用對照組設一個閾值，看實驗組的熒光強度有沒有高於或者低於該閾值。
請問流式細胞儀檢測細胞凋亡的原理是什麼？
3樓：匿名使用者
一、原理
在正常細胞中，磷脂醯絲氨酸（ps）只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂醯絲氨酸（ps）由脂膜內側翻向外側。annexin v是一種分子量為35~36kd的ca2+依賴性磷脂結合蛋白，與磷脂醯絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的磷脂醯絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此annexin v被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。
將annexin v進行熒光素（egfp、fitc）標記，以標記了的annexin v作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發生。
碘化丙啶（propidium iodide, pi）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但對凋亡中晚期的細胞和死細胞，pi能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將annexin v與pi匹配使用，就可以將處於不同凋亡時期的細胞區分開來。
二、注意事項
1、必須活細胞檢測，不能用能破壞細胞膜完整性的固定劑和穿透劑固定或穿膜。
2、特殊細胞的染色方法：在消化或吹打時，有些細胞（如神經元細胞）很容易受到損傷，導致晚期凋亡或壞死比例非常高，不能反映真實結果。實驗的解決方法：
先低速離心，吸取細胞培養板中的液體，留少許液體，加入適量pi和annexin-v染色10min後，將漂浮細胞吸至離心管中，離心洗滌兩次，用pbs漂洗貼壁細胞兩次，加胰酶消化後將細胞懸液移至另一離心管中，離心洗滌，再與漂浮細胞合併後上流式細胞儀檢測。應用該法可降低晚期凋亡和壞死比例，增加早期凋亡細胞比例。
3、由於annexin-v為鈣離子依賴的磷脂結合蛋白，只有在鈣離子存在的情況下與ps的親和力才大，因而在消化細胞時，建議一般不採用含edta的消化液。
4、必須設定陰性對照和補償對照（分別單染）。
4樓：匿名使用者
最常用的是annexinv /pi雙染檢測凋亡，凋亡的細胞膜上的ps（磷脂醯絲氨酸蛋白）會從膜內轉移到膜外，我們利用annexinv抗體即可與之結合，有結和得說明這個細胞有凋亡，pi是用來區分死活細胞的，一般認為annexinv陽性，pi陰性的那群細胞即為早期凋亡細胞。
用流式細胞儀檢測各個象限的意義
5樓：匿名使用者
要看你是什麼染料標記了例如臨床上，最常用的熒光染料主要有三大種： fitc、pe和pecy5。肉眼觀察，fitc為綠色；pe為橙色； pecy5為紅色。
它們都在488奈米被激發。檢測波長分別是：fitc是525奈米；pe是575奈米；pecy5是675奈米。
實際上，熒光的變化是在一個範圍內。這時候，熒光之間有可能重疊，需要進行熒光補償的調節。所以可以看到，例如fitc和pe、pi，它們發出的波長有交叉，要想檢測fitc，需要把pe和pi的訊號去掉，也就是熒光補償需要調節的意義。
在臨床上也是常常用兩種熒光染料直接染色細胞，從而可以得到細胞更多的資訊。例如在檢測b細胞和t細胞的時候，可以用cd3和cd19同時加在試劑，可以同時與細胞進行孵育。我們將cd3標記成fitc，cd19標記成pe。
有的淋巴細胞只表達cd3，有的細胞表達cd19；這樣，我們就可以檢測到cd3陽cd19陰的細胞就是t淋巴細胞；而cd3陰cd19陽的細胞就是b淋巴細胞。這樣我們能夠得到更有效的資料分析。
6樓：鄭舉敦
左下為正常細胞，左上為壞死細胞；右上為晚期凋亡細胞，右下為早期凋亡細胞。
如何用流式細胞儀檢測細胞內的,如何用流式細胞儀檢測細胞內的ROS
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