1樓：匿名使用者
兩個峰長什麼樣？是挨在一起的還是離的很遠的？縱座標最高峰是多少？是同一個峰出現一個小缺口的樣子嗎？如果可以請將原圖傳上
誰能具體解釋一下熒光定量pcr中溶解曲線的意思以及作用
2樓：奔馬的香香豬
溶解曲線分析可以用來確定不同的反應產物，包括非特異性產物。溶解曲線分析可以用來確定不同的反應產物，包括非特異性產物。擴增反應完成後，通過逐漸增加溫度同時監測每一步的熒光訊號來產生溶解曲線，隨著反應中雙鏈dna變性，熒光染料又回覆到遊離狀態導致熒光訊號降低，用熒光訊號改變的負的一次導數與溫度作圖，在擴增產物的溶解溫度上有一特徵峰（tm，dna雙鏈解鏈50%的溫度），用這個特徵峰就可以將特異產物與其它產物如引物二聚體區分開，因為它們在不同的溫度溶解.
這個一般是用syby green作為熒光染料的時候需要做的工作！我們實驗室用bioghc elitefast sybr kit檢測dna,熔解曲線是為了驗證擴增產物特異性的，要是熔解曲線是單峰說明產物只有一條，結果較好；要是雙峰說明產物不特異，可能存在引物二聚體或非特異性擴增，有可能你的引物設計有問題。
3樓：匿名使用者
溶解曲線是判斷擴增產物是否單一的曲線，顧名思義，其跟模板（或其濃度）沒有關係，擴增什麼基因就應該有其相對應的溶解曲線，類似於電泳。那麼你擴增幾種基因就應該有幾種對應的峰（一般sybr法的目的基因在80~90℃之間），我說的是一般情況，這個跟擴增片段長短有關係。出現其他峰就該考慮是否為引物二聚體（一般為60~75℃之間）視引物長度而定，而基因組dna汙染的峰會在90℃以後。
出現引物二聚體可能是引物設計、引物加量等原因（也有可能是從加完反應液到上機開始pcr這之間的時間過長）所致；基因組dna那麼考慮設計跨內含子引物或者實驗之前做gdna的消除工作。而陰性對照有目的峰那可能就是模板汙染，注意實驗操作等避免模板汙染。
詳細請見我的回答
4樓：表詠蒿樂蓉
用syber
green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。反應結束後，逐漸加溫。和syber
green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber
green結合。一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。
曲線的橫座標是溫度，而縱座標是熒光訊號的變化！開始加熱，訊號變化不大，所以幾乎是平的，接近tm時，突然變化加大，所以出現峰值。再升溫，產物全部解離，就又是一條直線了。
如果有非特異性產物，在加熱過程中就會出現一些比較矮，寬的峰。
求助，熒光定量pcr擴增曲線和溶解曲線
5樓：抹不掉呀
實時pcr產物的tm值大小一般會在80deg;上下，所以溶解曲線不必從40deg;開始，可以從65deg;開始進行溶解曲線繪製，另外在產物之前出現的小峰，同時也在陰性對照中出現了，應該是引物二聚體或者是非特異的擴增。
6樓：真莉莉畢田
通過你的描述目前還有很多資訊不實很瞭解：目的片段長度？pcr反應條件？
管家基因的溶解曲線怎麼樣？做的什麼實驗？是否將產物跑了電泳，條帶怎麼樣？
你可以將上述問題整理一下在一些專業性較強的生物論壇發帖子讓其他大神幫你分析一下。比如丁香園、生物秀等等。
出現怪異的溶解曲線大部分都是機器設定或者反應體系的問題，建議：
1、將擴增產物跑一下電泳，看一下目的條帶亮不亮2、一般定量pcr擴增後目的片段的峰在80~90℃之間，反應條件確認一下設定是否有問題
3、適當增加模板量或者減少引物濃度。
4、用的是哪個公司的酶？問一下這個公司的技術支援
實時熒光定量pcr沒出現擴增曲線為什麼
7樓：匿名使用者
說明擴增失敗。常見原因如下：（1）定量試劑質量較差；（2）模板質量太差；（3）引物質量太差；（4）pcr擴增時反應程式的設定有問題。
誰能具體解釋一下熒光定量pcr中溶解曲線的意思以及作用
8樓：匿名使用者
這個用於syber green實時pcr。而使用探針的不需要。
因為syber green是非特異性結合，所以如果有非特異性的序列被擴增，也會同樣產生訊號。在設計引物的時候，可以計算出被擴增序列的tm。pcr反應完成以後，開始進行解離曲線的測量。
一般是對反應產物逐步加溫，每增加一度，測訊號一次。pcr產物會在溫度達到tm時發生解離，熒光訊號會一下子消失、如果把溫度和熒光訊號的變化做一個圖，就會看到一開始，熒光訊號沒有變化，是一個平直的線。達到tm附近是，會有一個比較銳利的峰，說明訊號的變化很大，繼續加熱超過tm，這是雙鏈都開啟了。
所以訊號也不會再有變化，所以又是平直的線。
如果產物都是特異性的，就是我上面說的那樣。如果有非特異性產物，就會出現不在tm就出現峰值，或者有矮而胖的峰值等等異常情況出現，這樣，那個管子的樣本就不能用了。
熒光定量pcr 溶解曲線出現雜峰，不知是引物問題還是什麼
9樓：南京金益柏生物科技****
用來做測試的cdna濃度應該比較高，而正式進行定量的模板濃度應該是有高有低吧，低濃度下出現非特異性溶解峰比較正常
請問：實時熒光定量pcr怎樣設定才能有溶解曲線？
10樓：匿名使用者
有一種可能是，在試驗開始的設定階段，需要為整個實驗設計出熔解曲線的程式，這個您可能忘記了。
11樓：匿名使用者
在設定反應程式時，在最後加一步
實時熒光定量pcr，溶解曲線怎麼判斷是否為目的產物
12樓：南京金益柏生物科技****
根據曲線初步判斷，整個實驗設計還可以！你做相對定量嗎，將樣品結果與對照看看基因表達量分析就可以了！ 如果絕對定量，需要進一步實驗吧！
13樓：為青生物
溶解曲線的單峰明顯，橫座標在80度以上，一般就是pcr產物
熒光定量pcr擴增曲線基線過高什麼原因
探針濃度過高 體系中有熒光物質汙染 擴增效率低 我師兄用biog熒光定量pcr試劑盒擴增效果特別好，曲線非常典型，反應速度也很快，沒有遇到這個問題 熒光定量pcr中擴增曲線能說明什麼問題 在熒光法定量pcr中溶解曲線直接表示了引物的特異性,如果是單一的峰,那麼我們要看的是tm值在 通常情況下都是80...
我的乙型肝炎病毒定量,實時熒光定量PCR,結果991E
樓主你好 bai 你的病毒數量略微偏高du 若肝功能正常zhi則不建議 dao使用抗病毒 回,效果不會好,而且答容易發生耐藥 不知兩對半結果如何?但可以大概判斷的是你現在處於免疫耐受狀態,即你自己的免疫力並未對乙肝病毒產生攻擊,因此肝功正常。所以建議使用免疫調節 激發和調動免疫功能,同時定期複查肝功...
乙肝病毒hbv dna實時熒光定量pcr檢測結果怎麼看？我的
這個copy檢查結果說明你媳婦體內的乙肝病毒傳染性比較弱，病毒少。建議在懷孕前就要做好充分的準備，選擇最佳懷孕時機，也就是在肝功能正常，體內病毒含量比較低的情況下懷孕。乙肝小三陽懷孕後，需要注意在7,8,9這三個月，分別接種一支高效價乙肝免.6211 病毒量超出正常值了，需要進一步結合肝功能和彩超來...