pcr擴增產物的特異性與哪些因素有關

2021-03-03 20:37:52 字數 897 閱讀 5155

1樓:匿名使用者

pcr產物的電泳檢測時間 一般為48h以內,有些最好於當日電泳檢測,大於48h後帶型不規則甚致消失. 假陰性,不出現擴增條帶 pcr反應的關鍵環節有①模板核酸的製備,②引物的質量與特異性,③酶的質量及, ④pcr迴圈條件.尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。

pcr非特異性擴增指的是你進行pcr所擴增出來的條帶不是所要的,引物與模板在非目的條帶處有錯配,導致延伸產物不是目的條帶。非特異性擴增在瓊脂糖電泳時可以看到在目的條帶外出現了其他條帶。

引起非特異性擴增的原因有很多,mg2+濃度過高、退火溫度太低、引物特異性不好等等原因

2樓:南京金益柏生物科技****

首先,引物特異性要好 再,注意操作,避免交叉汙染等

pcr出不來,引物特異性不高怎麼辦

3樓:北京索萊寶科技****

建議:1. 不表達是很可能的,查閱文獻。可以換一種細胞的cdna,也可以重新提一次***的。

2. 引物設計的的時候可以不加酶切位點,與基因的完全匹配,可以適當增加長度(30-40bp)。

3. pcr時可設計一個正對照,保證pcr的過程沒問題。

4.適當降低一點退火溫度,使用兩輪pcr試試

熒光定量pcr方法的特異性和準確度怎麼計算

4樓:南京金益柏生物科技****

特異性主要看檢測的目的樣品是否是專一的,準確度主要看測量資料之間的偏差

組織特異性的qrt-pcr怎麼計算表達量

5樓:南京金益柏生物科技****

(qrt-pcr) ,是一種應用廣泛的研究基因表達模式的方法,尤其是在樣品量少

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