實時熒光定量PCR的資料分析,Ct可以是負的嗎

2021-04-17 22:13:01 字數 4183 閱讀 7272

1樓:龍鳳油洺月

當然可以了,只是兩個靶標ct值得差值。如果是snp分型,必須有正有負才行。

做熒光定量pcr時,△△ct值是什麼意思,它的計算公式是什麼

2樓:北京索萊寶科技****

△△ct = △ct(試驗樣品) — △ct(基準樣品)△ct(試驗樣品) = ct(試驗樣品,目的基因) — ct(試驗樣品,內參基因)

△ct(基準樣品) = ct(基準樣品,目的基因) — ct(基準樣品,內參基因)

2 -△△ct =2 -(-1.2)= 2.30

實時熒光絕對定量pcr實驗資料分析哪個指標啊?

3樓:匿名使用者

ct,是從基線到指數增長的拐點所對應的迴圈次數,儀器中給出的ct就是你每個孔實際的ct值

ct mean,是你相同樣品的幾個重複的ct值得平均值如果是做的相對定量,用ctmean的結果就可以了,計算方法就是r=2-δδct,現在很多儀器你只要設定的時候明確標出內參基因和目的基因,這個結果也是會有自帶軟體給計算出來的。

如果你是做絕對定量,那更方便,你只要在儀器設定的時候把你的標準品含量依次輸入,最後軟體會自動生成標準曲線什麼的,你最後只要分析og sq的結果就可以了。

4樓:匿名使用者

一般是分析他的ct,

如果是相對定量的話就是根據各樣品的ct值分析表達量的差異,

絕對定量的話就再看它的定量值,就是拷貝數

請問:做熒光定量pcr時,△△ct值是什麼意思,它的計算公式是什麼? 20

5樓:禾鳥

△△ct是熒光定量計算公式的簡化形式,用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。

ct=-1/lg(1+ex)*lgx₀+lgn/lg(1+ex),其中,n為擴增反應的迴圈次數,x₀為初始模板量,ex為擴增效率,n為熒光擴增訊號達到閾值強度時擴增產物的量。△ct(n)=ct(目的基因)-ct(內參基因);△△ct(n)=△ct(n)-△ct(1)。

起始拷貝數越多,ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線,其中橫座標代表起始拷貝數的對數,縱座標代ct值。因此,只要獲得未知樣品的ct值,即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。

擴充套件資料

熒光定量pcr的原理:

熒光定量pcr技術:在pcr反應體系中加入熒光基團,通過熒光訊號不斷累積而實現實時監測pcr全程,然後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時熒光定量pcr中,對全程pcr擴增過程進行實時檢測,根據反應時間和熒光訊號的變化可以繪製成一條曲線。

實時熒光定量常用的熒光化學分類有sybr green i法和tag man探針法。

ct值:c代表cycle,t代表threshold,ct值的含義是每個反應管內的熒光訊號到達設定的域值時所經歷的迴圈數。

6樓:一生一個乖雨飛

△△ct這是相對熒光定量的一個計算公式的簡化形式,用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。

ct= -k lgx0+ b(線性方程)用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度

斜率=-1/lg(1+e)

擴增效率e=1, 斜率=-3.32

擴增效率範圍:90%-110%

斜率範圍:-3.1和-3.59之間

例如,想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別,選取18s作為內參基因,就用a基因的ct值減去18s的ct值,得到△ct1,用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2,然後用△ct1-△ct2=△△ct,而a,b基因的表達量差別為2(-δδct)次方。

當然這計算方法是基於熒光定量的數學計算模型簡化來的,平時使用沒什麼問題,如果兩個目的基因的擴增效率不一樣,這個計算方法是不能用的。

7樓:匿名使用者

ct= -k lgx0+ b(線性方程)用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度

斜率=-1/lg(1+e)

擴增效率e=1, 斜率=-3.32

擴增效率範圍:90%-110%

斜率範圍:-3.1和-3.59之間

△△ct這是相對熒光定量的一個計算公式的簡化形式,用於比較不同樣品之間的差別或變化比率

例如,想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別,選取18s作為內參基因,就用a基因的ct值減去18s的ct值,得到△ct1,用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2,然後用△ct1-△ct2=△△ct,而a,b基因的表達量差別為2(-δδct)次方,當然這中計算方法是基於熒光定量的數學計算模型簡化來的,平時隨便用用沒什麼問題,如果你的兩個目的基因的擴增效率不一樣,這個計算方法是不能用的。

8樓:匿名使用者

我這邊有關於△△ct法的相關文獻以及推導公式,方便的話可以給我留一下你的郵箱

關於實時熒光pcr檢測2-△△ct計算結果?

9樓:塗含秀扶紹

這個很簡單啊。你做了一次實驗,得到的樣本做了一次pcr,得到了一次的相對定量(設對照組為1)。然後重新做實驗,再做pcr,又得到一組,這樣至少重複3次,就有3組相對定量了。計算標準差

對照組的標準差:取對照組的平均ct值設為1,

3次試驗的ct值根據2-△△ct計算相對量,可以算出對照組的標準差。

您好,我想問一下實時熒光定量pcr的資料分析!

10樓:傻蛋嘟嘟

用2-△△ ct法算的話,應如何算?

假設檢測a基因,ct分別為(這裡記住ct越大,表明相對含量越低)普通組/test1:28

實驗組1/test2:29

實驗組2/test3:30

這時候要設對照了,假設test1為對照組(普通組),當然是以普通組為對照

那麼,相對含量為:

普通組/test1:1

實驗組1/test2:2^-(28-29)=1/2=0.5實驗組2/test3:

2^-(28-30)=1/4=0.25a基因在實驗組1和實驗組2中的表達量,分別下降2倍和4倍!

所以,就出來啦,結果

對於每組不同部位的比較的話,將其中一個處理為1進行比較嗎?

如實驗組1

testis

brain

liver

muscle

可以把任何一個作為1,作為對照,但是要在figure 的legend中註明出來,說清楚就好了!

那對於三個組中的同一部位的比較的話,難道也要將其中一組處理為1嗎?

是的,可以,如

brain

普通組/test1

實驗組1/test2

實驗組2/test3

就以普通組/test1,為對照組,設為1,其他為相對含量,也要在figure 的legend中註明出來說清楚!

11樓:匿名使用者

這個很簡單。你把普通組的某個部位的相對量設為1。其他的,不管是組內的,還是組間的,都用△△ct的方法算出相對量。

再進行比較。基本概念就是設一個點為基點,其他的都是相對值。不要每比一次都設一個1。

我想問一下熒光定量pcr法用2-△△ct計算相對定量的問題

12樓:

做了一個實驗,內部參考電壓可以得到幾個ct值,會得到多個目標基因。在這種情況下,根據ct值的平均值,將得到的比率(相對量)。

實驗肯定不是唯一的一次,至少重複3次。這將是一個倍數的3個或更多,得到。 3個以上的值,你可以計算平均值和標準偏差的。

13樓:塔渟盛淑賢

你一次實驗做的資料,內參可以得到幾個ct值,目的基因也會得到幾個。這樣的話,根據平均的ct值,就會得到一個倍數(相對量)。

實驗肯定不會只做一次吧,至少重複3次以上。這樣就會得到3個以上的倍數了。3個以上的數值就可以算均數和標準差了。

實時熒光定量pcr因子表達量越少ct值越小嗎

14樓:匿名使用者

所謂ct值,就是最先出

現超過閾值訊號的那個迴圈數。或者說是到了第幾個迴圈專才出現超過閾值的訊號。屬

c代表的是cycle,迴圈數目,t代表的是threshold,閾值。

所以表達量越少的話,需要越多的迴圈才能擴增出來。也就是ct值越高

15樓:匿名使用者

表達量越高ct值越小,成反比。

實時熒光絕對定量PCR實驗資料分析哪個指標啊

ct,是從基線到指數增長的拐點所對應的迴圈次數,儀器中給出的ct就是你每個孔實際的ct值 ct mean,是你相同樣品的幾個重複的ct值得平均值如果是做的相對定量,用ctmean的結果就可以了,計算方法就是r 2 ct,現在很多儀器你只要設定的時候明確標出內參基因和目的基因,這個結果也是會有自帶軟體...

實時熒光定量PCR擴增actin溶解曲線怎麼兩個峰

兩個峰長什麼樣?是挨在一起的還是離的很遠的?縱座標最高峰是多少?是同一個峰出現一個小缺口的樣子嗎?如果可以請將原圖傳上 誰能具體解釋一下熒光定量pcr中溶解曲線的意思以及作用 溶解曲線分析可以用來確定不同的反應產物,包括非特異性產物。溶解曲線分析可以用來確定不同的反應產物,包括非特異性產物。擴增反應...

我的乙型肝炎病毒定量,實時熒光定量PCR,結果991E

樓主你好 bai 你的病毒數量略微偏高du 若肝功能正常zhi則不建議 dao使用抗病毒 回,效果不會好,而且答容易發生耐藥 不知兩對半結果如何?但可以大概判斷的是你現在處於免疫耐受狀態,即你自己的免疫力並未對乙肝病毒產生攻擊,因此肝功正常。所以建議使用免疫調節 激發和調動免疫功能,同時定期複查肝功...