1樓：匿名使用者
根據曲線初步判斷，整個實驗設計還可以！你做相對定量嗎，將樣品結果與對照看看基因表達量分析就可以了！ 如果絕對定量，需要進一步實驗吧！
誰能具體解釋一下熒光定量pcr中溶解曲線的意思以及作用
2樓：匿名使用者
溶解曲線是判斷擴增產物是否單一的曲線，顧名思義，其跟模板（或其濃度）沒有關係，擴增什麼基因就應該有其相對應的溶解曲線，類似於電泳。那麼你擴增幾種基因就應該有幾種對應的峰（一般sybr法的目的基因在80~90℃之間），我說的是一般情況，這個跟擴增片段長短有關係。出現其他峰就該考慮是否為引物二聚體（一般為60~75℃之間）視引物長度而定，而基因組dna汙染的峰會在90℃以後。
出現引物二聚體可能是引物設計、引物加量等原因（也有可能是從加完反應液到上機開始pcr這之間的時間過長）所致；基因組dna那麼考慮設計跨內含子引物或者實驗之前做gdna的消除工作。而陰性對照有目的峰那可能就是模板汙染，注意實驗操作等避免模板汙染。
詳細請見我的回答
3樓：表詠蒿樂蓉
用syber
green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。反應結束後，逐漸加溫。和syber
green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber
green結合。一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。
曲線的橫座標是溫度，而縱座標是熒光訊號的變化！開始加熱，訊號變化不大，所以幾乎是平的，接近tm時，突然變化加大，所以出現峰值。再升溫，產物全部解離，就又是一條直線了。
如果有非特異性產物，在加熱過程中就會出現一些比較矮，寬的峰。
請問我這個實時熒光定量pcr融解曲線為什麼是從負值開始的？結果可用嗎？
4樓：分子達人
看這個結果有幾個猜想：
1)如果之前做實驗的時候，儀器沒有出現過這種情況，有可能是儀器出現錯誤，建議重啟一下，或者改軟體需要重新校準一下。
2)從這個結果來看，引物應該是可以用的，主峰也只有一個，特異性還是有的，不過還要參考一下擴增曲線，ct值如果在35個迴圈以內，應該是沒有問題的。
熒光定量pcr熔解曲線
5樓：匿名使用者
溶解曲線是在正常的pcr反應基礎上加一個溶解曲線的反應條件，其中當溫度由60℃升至95℃時，pcr儀每隔一定的溫度檢測一次訊號。最後將收集的訊號繪製出溶解曲線，然後將溶解曲線一次微分就會得到我們平時看到的峰性圖。每一條線代表著某個孔裡的反應體系裡產物的單一情況，某一條線如果為單峰且在一定合理的溫度範圍內（一般為80~90℃）則認為正常，如果為雙峰則可能有非特異性擴增。
由此可以判斷產物是否為目的基因且是否單一。內參有內參的線，目的基因有目的基因的線，同一條線不會出現兩個基因的峰。你可以看一下溶解曲線的橫、縱座標。
6樓：烏冬蛋白
內參量多，迴圈數少吧，我也不熟
怎麼理解熒光定量pcr的溶解曲線
7樓：匿名使用者
熒光定量pcr的溶解曲線理解：用syber green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。應結束後，逐漸加溫。和syber
green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber
green結合。
一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。曲線的橫座標是溫度，而縱座標是熒光訊號的變化，開始加熱，訊號變化不大，所以幾乎是平的。
接近tm時，突然變化加大，所以出現峰值。再升溫，產物全部解離，就又是一條直線了。如果有非特異性產物，在加熱過程中就會出現一些比較矮，寬的峰。
8樓：匿名使用者
這個一般是用syby green作為熒光染料的時候需要做的工作！
因為syby green染料是非特異的染料，只要有擴增，染料就可以鑲嵌在雙鏈中發出熒光。我們做溶解曲線是為了觀察我們擴增發出熒光的片段是不是我們需要的產物。如果溶解曲線做出來只有單峰，且出鋒位置是你的退火溫度，那麼這個是你的產物發出的熒光，實驗結果有效。
如果出現多鋒或退火溫度不對，那麼這個實驗結果是不可信的！你需要再次調整！
實時熒光定量pcr，溶解曲線怎麼判斷是否為目的產物
9樓：南京金益柏生物科技****
根據曲線初步判斷，整個實驗設計還可以！你做相對定量嗎，將樣品結果與對照看看基因表達量分析就可以了！ 如果絕對定量，需要進一步實驗吧！
10樓：為青生物
溶解曲線的單峰明顯，橫座標在80度以上，一般就是pcr產物
請問：實時熒光定量pcr怎樣設定才能有溶解曲線？
11樓：匿名使用者
有一種可能是，在試驗開始的設定階段，需要為整個實驗設計出熔解曲線的程式，這個您可能忘記了。
12樓：匿名使用者
在設定反應程式時，在最後加一步
實時熒光定量PCR擴增actin溶解曲線怎麼兩個峰
兩個峰長什麼樣？是挨在一起的還是離的很遠的？縱座標最高峰是多少？是同一個峰出現一個小缺口的樣子嗎？如果可以請將原圖傳上 誰能具體解釋一下熒光定量pcr中溶解曲線的意思以及作用 溶解曲線分析可以用來確定不同的反應產物，包括非特異性產物。溶解曲線分析可以用來確定不同的反應產物，包括非特異性產物。擴增反應...
求助熒光定量溶解曲線的問題，求助熒光定量溶解曲線的問題
熒光定量的溶解曲線主要是看是否存在非特異性擴增如引物二聚體等，當只有單一峰時且值在退火溫度說明特異性擴增，結果可用 怎麼理解熒光定量pcr的溶解曲線 熒光定量pcr的溶解曲線理解 用syber green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。應結束後，逐漸加溫。和syber green分子結合...
熒光定量pcr擴增曲線基線過高什麼原因
探針濃度過高 體系中有熒光物質汙染 擴增效率低 我師兄用biog熒光定量pcr試劑盒擴增效果特別好，曲線非常典型，反應速度也很快，沒有遇到這個問題 熒光定量pcr中擴增曲線能說明什麼問題 在熒光法定量pcr中溶解曲線直接表示了引物的特異性,如果是單一的峰,那麼我們要看的是tm值在 通常情況下都是80...