什麼是轉染?為什麼要質粒轉染,什麼是轉染?為什麼要質粒轉染?

2021-03-03 21:44:18 字數 2408 閱讀 1390

1樓:1987八月初六

轉染(transfection):指真核細胞由於外源dna摻入而獲得新的遺傳標誌的過程。常規轉染技術可分為瞬時轉染和穩定轉染(永久轉染)兩大類。

轉染目的:研究你的目的片段到細胞內的表達。

轉染一般是將目的基因構建到某個載體,將構建好的重組質粒匯入細胞中,這樣就能表達你所要的目的蛋白用於後續實驗。

質粒轉染和病毒轉染有什麼本質上的區別

2樓:阿樓愛吃肉

兩者在本質上並沒有區別。

無論是質粒轉染,還是病

毒轉染,均是真核細胞主動或被動匯入外源dn**段而獲得新的表型的過程。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷髮展,轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中,其應用越來越廣泛。

隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬於通過物理方法將基因匯入細胞的範例;

化學介導方法很多,如經典的磷酸鈣共沉澱法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法,有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。

3樓:匿名使用者

一、質粒轉染:相對簡單的基因傳遞方式,與三種病毒載體主動進行細胞攻擊侵染方式不

同,質粒轉染屬於被動擴散。

質粒轉染的優點:質粒載體的構建流程相對簡單,速度快(病毒載體都需要先構建載體後包裝成病毒顆粒)。

質粒轉染的缺點也十分明顯:

1)在細胞水平,質粒轉染效率不穩定,不同細胞依照不同的轉染方法和轉染介質,效率差

別較大,且大部分方法效率不高;

2)質粒轉染一般入核效率低,特別是陽離子脂質體,陽離子聚合物等介質,電轉質粒入核

的效率則比介質轉高不少,但比起慢病毒轉染,效率仍然低很多,且對細胞損傷較大。

二、病毒載體轉染:病毒載體相對於質粒,優勢十分明顯

病毒載體的優點:轉染效率高,應用不同的病毒載體工具可實現細胞和動物的高效轉導

和穩定轉導。

病毒載體的缺點:不同的病毒載體的包裝需要比較複雜流程和工藝優化,相對技術門檻

較高。我們實驗室的經費比較有限,我們用rfect-dna轉染293細胞

4樓:

先說下相同點。

質粒轉染和病毒轉染本質上都

是把外源基因匯入細胞或活體,起到的作用是把外源基因放入細胞,是相同的。

區別,簡單的可以從英文角度說一下,質粒轉染中的轉染這個詞是transfection,病毒轉染中的轉染可以是transduction。可以理解為把質粒(目的基因)transfection 到病毒的域,病毒接收到目的基因,使用病毒又把我們的質粒(目的基因)transduction 進細胞。

如果你是學生問這個問題可能問的是兩者用起來有什麼區別。

質粒轉染需要用轉染試劑或者工具進行質粒的匯入。

病毒轉染中病毒粒子是病毒殼(介導細胞轉導/引入整合酶/介導體內靶向轉導)+目的基因的複合物,不用或者用簡單的試劑就能完成基因匯入。

詳細的就不說了,內容太多,這個問題太廣。

5樓:匿名使用者

平時都是用無菌的質粒dna轉染,質粒轉染不一定需要慢病毒包裝,lipo3000是屬於質粒dna和sirna都能轉染的,我們實驗室用專門轉染質粒dna的deofecteu。

6樓:愛我家菜菜

常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(永久轉染)。前者外源dna/rna不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用於啟動子和其它調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒dna轉染效率較高,在轉染後24-72小時內(依賴於各種不同的構建)分析結果,常常用到一些報告系統如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測。

後者也稱穩定轉染,外源dna既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種遊離體(episome)存在。儘管線性dna比超螺旋dna轉入量低但整合率高。外源dna整合到染色體中概率很小,大約1/104轉染細胞能整合,通常需要通過一些選擇性標記,如來氨丙基轉移酶(aph;新黴素抗性基因),潮黴素b磷酸轉移酶(hph),胸苷激酶(tk)等反覆篩選,得到穩定轉染的同源細胞系。

質粒轉染細胞後,不表達的原因有哪些

7樓:匿名使用者

首先要確定是否已成功轉染,可以用帶熒光的載體進行核實,如觀察到熒光,這說明轉染成功;

其次要核實載體本身在轉染前是否存在問題,之前我們也遇到過類似情況,借的別人的載體,實際載體本身有問題,當然無法表達;

最後,要考慮轉染試劑的問題,如是否過期,是否能正常工作等。

8樓:愛瘋煙火的男孩

沒有與宿主細胞的染色體整合,目的基因被破壞

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