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超氧物歧化酶（superoxide di**utase，sod）
活性的測定 sod採用氮藍四唑（nitro-blue tetrazolium，nbt）法（beauchamp和fridovich，1971）。反應步驟為：取200μl粗提液，加入3.
7 ml nbt反應液50mmol/lph7.8的磷酸緩衝液（pbs）配製的含77.12μmol/l氮藍四唑, 100μmol/ledta－na2和13.
37mmol/l甲硫氨酸溶液〕，在30℃下保溫2分鐘後加入100μl核黃素溶液（ph7.8的50mmol/l磷酸緩衝液中含80.2μmol/l 核黃素和100μmol/ledta－na2），在4000lx日光下反應20min。
然後迅速測定a560。以不照光的管做空白。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μl。
酶活性按以下公式計算：以抑制nbt光化還原的50％為一個sod活性單位，結果以u/mg蛋白表示。以加緩衝液代替酶液的作為對照。
sod總活性＝(ack－ae)×v/(ack×0.5×w×vt) 式中， ack為照光對照管的吸光度；ae為樣品管的吸光度；v為樣品液總體積（ml）；vt為測定時樣品用量（ml）；w為樣品鮮重（g）或蛋白質含量（mg）。
過氧化氫酶（catalase，cat）
活性測定 cat 活性參照aebi (1984)[7]的方法進行測定。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μl 。400 μl反應液含50 mmol/l的pbs (ph 7.
0)，30 mmol/l的h2o2和50 µl粗酶液。反應從加入過氧化氫開始計時，連續測定在240 nm吸光度的降低值。酶活性定義為：
一個過氧化氫酶單位相當於在規定條件下於溫度25℃，ph7.0條件下1分鐘分解1μmol過氧化氫所需酶量，結果以u/mg蛋白或u/g鮮重表示。
多酚氧化酶（polyphenoloxidase，ppo）
活性的測定 ppo活性測定採用鄰苯二酚法（aquino-bolaños和mercado-silva，2004）。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μl。350µl反應液（用50mmol/l，ph6.
4的pbs配製，內含100µmol/l鄰苯二酚）中加入50 µl的粗酶液，平衡1分鐘後連續測定398nm吸光度的變化。以1分鐘內398nm吸光度上升0.01為一個酶活性單位，結果以u/mg蛋白或u/g鮮重表示。
過氧化物酶（peroxidase，pod）
活性測定pod活性測定採用愈創木酚法（lurie等，1997)。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μl。反應體系為30μl粗酶液，290 µl 0.
3%愈創木酚（用50 mmol/l的pbs配製，ph 6.4）和 80µl0.3%h2o2（用50 mmol/l的pbs配製，ph 6.
4）。反應在加入h2o2 後開始準確記時。連續吸光度在470 nm的上升值。
酶活性以每分鐘上升0.01為一個單位，結果以u/mg蛋白或u/g鮮重表示。
酶活力的常用測定方法？
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常用的測定方法有取樣法和連續法。
1、取樣法
在酶反應開始後不同的時間，從反應系統中取出一定量的反應液，並用適當方法停止其反應，再根據產物和底物在化學性質上的差別進行分析，求得單位時間內酶促反應的變化量。
2、連續法
基於底物和產物在物理化學性質上的不同，在反應過程中對反應系統新增酶的變性劑以終止反應，常用的連續測定法是光吸收測定法，即根據產物和底物在某一波長或波段上有明顯的特徵吸收差別而建立起來的連續觀測方法，幾乎所有的氧化還原酶都可用此法測定。
此外如熒光法、旋光法、電化學法也是常用的連續測定方法。對不易直接測定的反應，可使用酶偶聯分析法，即用過量、專一的「偶聯工具酶」，使被測反應繼續進行到某一可直接測定的階段。近年來，酶活性的測定工作正向兩個方向發展，超微量酶活的靈敏測定，實現測定過程的自動化控制。
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酶活力的大小可以用在一定條件下，它所催化的某一化學反應的轉化速率來表示，即酶催化的轉化速率越快，酶的活力就越高；反之，速率越慢，酶的活力就越低。所以，測定酶的活力就是測定酶促轉化速率。酶轉化速率可以用單位時間內單位體積中底物的減少量或產物的增加量來表示。
酶活力的測定既可以通過定量測定酶反應的產物或底物數量隨反應時間的變化，也可以通過定量測定酶反應底物中某一性質的變化，如黏度變化來測定。通常是在酶的最適ph 值和離子強度以及指定的溫度下測定酶活力。
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酶活力的測定方法：有兩種主要方法
即終止反應法和連續反應法。
終止反應法：是在恆溫反應系統中，每隔一定時間，取出一定體積的反應液，用強酸強鹼或sds以及加熱等使反應立即停止，然後用化學法放射性化學法或酶偶聯法分析產物的形成量或底物的消耗量。這是最經典的酶活力測定方法，幾乎所有的酶都可以根據這一原理設計出具體的測定方法。
連續反應法：無須終止反應，而是在酶反應過程中用光化學儀器或電化學儀器等來監測反應的進**況，對記錄結果進行分析，然後計算出酶活力。
測定酶活性的主要影響因素有哪些
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1.反應速度
大多數酶促反應是可逆反應，其速度既受底物濃度的影響，也受產物生成量的影響。當底物濃度較高時，在反應的初期，其濃度變化甚微，產物生成量也很少，此時反應速度可看作是恆定的。酶反應動力學中所指速度就是反應的初速度。
2.底物濃度
米氏方程ν=νmax【s】/km+【s】是反映酶促反應速度與底物濃度關係的方程式，其中km稱米氏常數。
km值是酶的特徵常數之一，只與酶的性質有關，而與酶濃度無關。不同的酶，km值不同。同一個酶有幾種底物時，則對每一種底物各有一特定的km值，其中km值最小的底物一般稱為該酶的最適底物或天然底物。
綜上所述，根據酶的特性及定量原理，測定酶活力時，必須注意以下幾點：
（1）酶促反應過程中，只有最初一段時間內反應速度與酶濃度成正比，隨著反應時間的延長，反應速度即逐漸降低。
（2）要規定一定的反應條件，如時間、溫度、ph等，並在酶測定過程中保持這些反應條件的恆定，如溫度不得超過規定溫度的士1℃，ph應恆定。
（3）配製的底物濃度應準確且足夠大，底物液中應加入不抑制該酶活力的防腐劑並儲存於冰箱中，以防止底物被分解。
（4）標本要新鮮，由於絕大多數酶可因久置而活力降低，標本如無法及時測定，應儲存於冰箱中。用血漿時，應考慮到抗凝劑對酶反應的影響。有些酶在血細胞、血小板中的濃度比血清高，為此在採血、分離血清時，應注意防止溶血和白細胞的破裂。
（5）在測定過程中，所用儀器應絕對清潔，不應含有酶的抑制物，如酸、鹼、蛋白沉澱劑等。
什麼是酶活力測定的終點法？此法有何優缺點？
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酶活力測定常用的方法有終點法和動力學方法兩類。
終點法測定完成一定量反應所需的時間，如α-澱粉酶的活力測定。因為碘對澱粉呈現藍色反應，當澱粉溶液中加入澱粉酶後，碘的藍色反應消失而呈現紅棕色；碘對澱粉顏色反應消失的時間可表示澱粉酶活力的大小。碘對澱粉顏色反應消失花的時間越短，表示酶的活力越高。
動力學方法
測定一定時間內所起的化學反應量。
①比色法 如果酶反應的產物可與特定的化學試劑反應而生成穩定的有色溶液，且生成顏色的深淺與產物的濃度在一定的範圍內有線性關係可用此法。如蛋白酶的活力測定：蛋白酶可水解酪蛋白，產生的酪氨酸可與福林試劑反應生成穩定的藍色化合物，在一定的濃度範圍內，所生成藍色化合物顏色的深淺與酪氨酸的量之間有線性關係，可用於定量測定。
②量氣法 主要用於有氣體產生的酶促反應。如氨基酸脫羧酶、脲酶的活力測定。產生的二氧化碳量可用特製的儀器如瓦氏呼吸儀測定之。根據氣體變化和時間的關係，即可求得酶反應的速度。
③滴定法 如果產物之一是自由的酸性物質可用此法。如脂肪酶催化脂肪水解，脂肪酸的增加量代表脂肪酶的活力。
④分光光度法 利用底物和產物光吸收性質的不同，可直接測定反應混合物中底物的減少量或產物的增加量。幾乎所有的氧化還原酶都使用該法測定。如還原型輔酶ⅰ(nadh2)和輔酶ⅱ(nadph2)在340nm有吸收，而nad和nadp在該波長下無吸收，脫氫酶類可用該法測定。
該法測定迅速簡便，自動掃描分光光度計的使用對酶活力的快速準確的測定提供的極大的方便。
⑤放射測量法 是酶活力測定中較常用的一種方法。一般用放射性同位素標記底物，在反應進行到一定程度時，分離帶放射性同位素標記的產物並進行測定，就可測知反應進行的速度。常用的同位素有3h，14c，32p，35s，131i等。
如脲酶，將底物尿素用14c標記，產生的帶放射性的co2氣體可用標準計數法進行測定。
⑥酶偶聯分析 某些酶本身沒有合適的測定方法，但可偶聯另一個酶反應進行測定。其基本方法為：應用某一高度專一性的工具酶使被測酶反應能繼續進行到某一可直接連續且簡便準確測定階段的方法。
如：被測e1反應的產物b是某一脫氫酶(e2)的底物，向反應體系中加入足量的脫氫酶和nad+或nadph+，使反應由a經b繼續進行到c，然後測定nadh或nadph的特徵吸收光譜的變化，即可間接地測定e1的活力大小。如己糖激酶的活力測定即應用這一方法。
注意：使用該法要求指示酶必須很純，且具有高度的專一性，以免干擾反應而給測定帶來麻煩。
測定酶活性的條件是什麼
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我國檢驗學會檔案中對最適條件是這樣提出：①選合適的底物、輔因子、活化劑、變構劑的種類和濃度。②指示酶和輔助酶的種類和濃度。
③反應混合液的最適ph，緩衝液種類和濃度。④其它影響酶活性的因素，如去除各種抑制劑。並提出：
在某些情況下，為了獲得更好的測定重複性或更大的臨床價值，可考慮對上述「最適條件」作適度的修改。
7樓：匿名使用者
各種酶有各自最佳的酶活性溫度和ph等，不能一概而論。
酶活性可根據米氏方程測定若干個點，做出1/v與1/s圖，然後找出相應濃度下的酶活即可。
進行酶活力測定時應注意什麼,酶活力測定的注意事項有哪些？
底物濃度 酶濃度 溫度 離子強度和ph值 輔助因子 啟用劑 抑制劑 進行酶活力測定時應注意什麼 測定酶活力時，必須注意以下幾點 1 酶促反應過程中，只有最初一段時間內反應速度與酶濃度成正比，隨著反應時間的延長，反應速度即逐漸降低。2 要規定一定的反應條件，如時間 溫度 ph等，並在酶測定過程中保持這...
準確測定酶活力的實驗順序是，酶活力測定實驗中，對實驗結果影響最大的是哪個步驟，是各試劑的吸取嗎，為什麼？
加入復緩衝液 加入底制物 加入酶 保溫並計時 一段時間後檢測產物的量 酶活力也稱為酶活性，是指酶催化一定化學反應的能力。酶活力的大小可用在一定條件下，酶催化某一化學反應的速度來表示，酶催化反應速度愈大，酶活力愈高，反之活力愈低。2016全國卷一 加入緩衝液 加入底物 加入酶 保溫並計時 一段時間後檢...
測定酶活力時，為什麼要控制酶的稀釋倍數
1 底物濃度 除選擇適合的底物外，在實際應用中更多考慮的是底物濃度。由於 s 與反應速度v成雙曲線關係，在酶活性測定時，要求 s 達到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。2 酶濃度 在反應條件一定時，酶濃度與反應速度成正比。按照中間產物學說，只有 s e 時，酶才能被底物分子飽和，反應速度才能達到最大...