準確測定酶活力的實驗順序是,酶活力測定實驗中,對實驗結果影響最大的是哪個步驟,是各試劑的吸取嗎,為什麼?

2021-04-11 05:48:44 字數 2099 閱讀 9076

1樓:請叫我作文哥

加入復緩衝液→加入底制物→加入酶→保溫並計時→一段時間後檢測產物的量

酶活力也稱為酶活性,是指酶催化一定化學反應的能力。酶活力的大小可用在一定條件下,酶催化某一化學反應的速度來表示,酶催化反應速度愈大,酶活力愈高,反之活力愈低。

2樓:匿名使用者

2016全國卷一: 加入緩衝液→加入底物→加入酶→保溫並計時→一段時間後檢測產物的量

酶活力測定實驗中,對實驗結果影響最大的是哪個步驟,是各試劑的吸取嗎,為什麼?

3樓:匿名使用者

哦。。bai。。不知道你做的是du那種酶活zhi測定。。。我們常做熒dao

光淬滅的。吸取固版

然重要,權否則沒有可比性,可以稱作最大的影響吧。。。。試劑的吸取注意排槍的吸樣量是否相同就好。

當然還要注意各個試劑在系統中的穩定性之類的事吧。。。。

酶活力測定的注意事項有哪些

4樓:筆中從沫

測定酶活力時,必須注意以下幾點:

1、酶促反應過程中,只有最初一段時間內反應速度與酶濃度成正比,隨著反應時間的延長,反應速度即逐漸降低。

2、要規定一定的反應條件,如時間、溫度、ph等,並在酶測定過程中保持這些反應條件的恆定,如溫度不得超過規定溫度的士1℃,ph應恆定。

3、配製的底物濃度應準確且足夠大,底物液中應加入不抑制該酶活力的防腐劑並儲存於冰箱中,以防止底物被分解。

4、標本要新鮮,由於絕大多數酶可因久置而活力降低,標本如無法及時測定,應儲存於冰箱中。用血漿時,應考慮到抗凝劑對酶反應的影響。有些酶在血細胞、血小板中的濃度比血清高,為此在採血、分離血清時,應注意防止溶血和白細胞的破裂。

5、在測定過程中,所用儀器應絕對清潔,不應含有酶的抑制物,如酸、鹼、蛋白沉澱劑等。

5樓:匿名使用者

1.底物濃度 除選擇適合的底物外,在實際應用中更多考慮的是底物濃度。由於[s]與反應速度v成雙曲線關係,在酶活性測定時,要求[s]達到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。[s]範圍一般選擇在10~20km為宜,此時反應速度基本達到最大反應速度,測定的誤差在可接受範圍。

2.酶濃度 在反應條件一定時,酶濃度與反應速度成正比。按照中間產物學說,只有[s]>>[e]時,酶才能被底物分子飽和,反應速度才能達到最大值。因此當標本酶活力過高時,應將標本適當稀釋後再加以測定。

3.溫度 不同的酶最適溫度可以不同,多數酶的最適溫度在37~40℃,高於或低於最適溫度,酶活性都降低。目前,酶活性的測定溫度尚未統一,但常規實驗室多使用37℃。溫度對酶促反應的影響程度通常用溫度係數(q10)表示。

溫度係數指溫度每升高10℃,化學反應速度增加的倍數。q10通常為l~2。由溫度係數得知,溫度的變化對酶活性有著重要影響,因此要求酶活性測定要在恆溫條件下進行,溫度波動要控制在±1℃。

4.離子強度和ph值 在最適ph時,酶的活性最強,高於或低於最適ph,酶的活性都降低,多數酶的最適ph在5~8之間。在測定酶活性時,要求緩衝液具有足夠的緩衝容量,以便使ph值保持穩定。血漿或血清標本含有多種緩衝溶質,具有較強的緩衝能力。

為了防止血漿或血清標本緩衝溶質對反應液酸鹼度的影響,使ph不致偏離設定值,標本用量不宜過大,血漿或血清標本體積/反應液體積≤1/10為宜。

5 輔助因子 某些金屬離子和維生素類輔酶是結合酶的輔助因子,例如zn2+是羧基肽酶的輔基,mo6+是黃嘌呤氧化酶的輔基,nadh是不需氧脫氫酶的輔酶。這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現活性,因此在酶活性測定時,就要保證輔基或輔酶的供給。

6.啟用劑 有些酶在有啟用劑存在時才有活性或活性較高,例如mg2+是肌酸激酶的啟用劑,cl-是澱粉酶的啟用劑。因此在酶活性測定時,也要滿足酶對啟用劑的需要。

7.抑制劑 酶的抑制可分為不可逆抑制和可逆抑制,後者又可分為競爭性抑制和非競爭性抑制。重金屬離子和砷化物對巰基酶的抑制、有機磷對羥基酶的抑制屬於不可逆抑制;丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類藥物對二氫葉酸合成酶的抑制屬於競爭性抑制;哇巴因對na+,k+-atp酶的抑制屬於非競爭性抑制。抑制劑使酶活性降低,在測定酶活性時,應避免抑制劑的影響。

綜上所述,測定酶活性時,最適條件的選擇應該遵循最適底物濃度、最適溫度、最適ph值、滿足輔助因子和啟用劑、避免抑制劑的原則。

進行酶活力測定時應注意什麼,酶活力測定的注意事項有哪些?

底物濃度 酶濃度 溫度 離子強度和ph值 輔助因子 啟用劑 抑制劑 進行酶活力測定時應注意什麼 測定酶活力時,必須注意以下幾點 1 酶促反應過程中,只有最初一段時間內反應速度與酶濃度成正比,隨著反應時間的延長,反應速度即逐漸降低。2 要規定一定的反應條件,如時間 溫度 ph等,並在酶測定過程中保持這...

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測定酶活力時,為什麼要控制酶的稀釋倍數

1 底物濃度 除選擇適合的底物外,在實際應用中更多考慮的是底物濃度。由於 s 與反應速度v成雙曲線關係,在酶活性測定時,要求 s 達到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。2 酶濃度 在反應條件一定時,酶濃度與反應速度成正比。按照中間產物學說,只有 s e 時,酶才能被底物分子飽和,反應速度才能達到最大...