關於gfp基因如果匯入未知細菌,關於GFP基因如果匯入未知細菌

2021-12-20 01:42:38 字數 954 閱讀 8155

1樓:兵兵王

首先你概念錯了,不是所有質粒之間不相容,只有近緣的質粒是不相容的,或者說ori序列相同的質粒是不相容的。一個細菌中含有2種以上質粒是常有的事情。

當然可以構建別同一親和群的穿梭質粒。

你只能構建或者直接用帶有gfp的質粒轉化你的細菌。但其實你這事情很多未知,因此難度較大。

1 不知道未知細菌中質粒的複製起始序列因此不能確定質粒進去之後能否複製自己。

2 啟動子能否被識別,報告基因能否表達,你篩選方法不頂

3 土著質粒和新轉入質粒之間能否親和

針對這些 你只能一一排除

首先你可以試試把未知細菌中的質粒從你的細菌中去掉(很多物理方法),篩選空宿主(不含質粒的細菌),之後再把你的帶有gfp的質粒轉進去篩選便可。

得到空宿主,就排出了不相容性的可能性,條件就剩下轉入質粒的ori和啟動子是否識別,只要能識別ori和啟動子 那你很幸運 直接就篩選到了。

但若一直不能篩選到 就麻煩了。你只能隨機挑選被轉化菌株,提取其中質粒檢視是否成為隱祕質粒。若檢測到隱祕質粒,側說明ori可用,你需要對啟動子進行優化。

直到直接能篩選到你的報告基因gfp就完成了。

2樓:夜闌珊穎

首先要建立感受態細胞,用cacl2法或電擊法。搜一下具體的方案吧。這是個模式方案,很容易查到。

然後就是轉導過程了。gfp基因就會融合到質粒dna上。在抗性培養基上篩選(你可以先做一下你的未知細菌的抗性實驗,如氨苄抗性)。

參考實驗:大腸桿菌感受態細胞的製備;

gfp基因的轉化及誘導表達

gfp基因和哪個抗生素共存?

3樓:匿名使用者

這個沒啥關係。

gfp基因+氨苄基因,可和氨苄共存

gfp基因+卡那基因,可和卡那共存

取決於你自己想讓它和什麼共存,就連到帶那種抗生素基因的載體中去。

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