1樓：
當然要先用液態不加抗生素的lb復甦好不好。。。
不要糾結在轉化塗板的過程上 要麼就是你的質粒酶切完後**的片段不對 要麼就是你的膠**產物不對
2樓：203mm迫擊炮
你用什麼酶做的pcr？連t載體末端必須有a
感受態還有沒有用？最好轉個質粒驗證一下，做這個感受態是非常重要的。
膠**的時候有沒有把wash buffer 蒸發乾淨？
為什麼大腸桿菌感受態細胞製備和轉化
3樓：元霜
轉化實驗用bai液態的lb是為了讓細du胞恢復培
zhi養，也有人稱
之為讓其孵育，質dao粒或其他經專在液態lb中恢復屬培養後再塗布平板（固態培養基），是為了分散開，以培養單克隆。一般經37度倒置培養12-16h後，就可以看到有單個克隆長出，就可挑取了。
如何將一個質粒dna轉入到大腸桿菌感受態細胞中？並且如何鑑別是否轉化成功
4樓：涉谷的花
在樓上說的「通常使用選擇培養基來篩選大腸桿菌。例如重組質粒上帶有抗四環素基因，那麼使用帶有四環素的選擇培養基，將待測大腸桿菌接種到選擇培養基，只有成功轉入重組質粒的大腸桿菌才能在選擇培養基生長」的基礎上，也可將待測大腸桿菌接種到另一種抗生素培養基中，轉化成功則不長，也是一種加強的反向驗證。
如何鑑別一個質粒dna成功轉入到大腸桿菌感受態細胞中
5樓：萬能星球
通常使用選擇培養基來篩選大腸桿菌。例如重組質粒上帶有抗四環素基因，那麼使用帶有四環素的選擇培養基，將待測大腸桿菌接種到選擇培養基，只有成功轉入重組質粒的大腸桿菌才能在選擇培養基生長
6樓：前雲嵐徭唱
不對,通過轉化到感受態細菌中,不是細胞.感受態的大腸桿菌,可以自己製作也可以通過購買.之後將細菌凃到含有抗生素的板子上,長出克隆後挑取單克隆,將單克隆加入含有抗生素的細菌培養基中培養,之後提取質粒,提取質粒可以購買相應的試劑盒,按照試劑盒的說明書操作即可.
質粒是帶有抗性基因的,只有含有該質粒的細菌才能在含有對應抗生素的培養基中存活並增殖,這樣就能確保是你的表達載體質粒.當然為了防止雜菌的汙染,整個過程中最好是無菌操作.而表達載體質粒有可能出現突變等情況,所以可以在提出質粒之後,取少量質粒送測序,來確保序列的無誤.
如何將一個質粒dna轉入到大腸桿菌感受態細胞中
7樓：萘兒帕爾特管一
不對,通過轉化到感受態
細菌中,不是細胞.感受態的大腸桿菌,可以自己製作也可以通過購買回.之後答將細菌凃到含有抗生素的板子上,長出克隆後挑取單克隆,將單克隆加入含有抗生素的細菌培養基中培養,之後提取質粒,提取質粒可以購買相應的試劑盒,按照試劑盒的說明書操作即可.
質粒是帶有抗性基因的,只有含有該質粒的細菌才能在含有對應抗生素的培養基中存活並增殖,這樣就能確保是你的表達載體質粒.當然為了防止雜菌的汙染,整個過程中最好是無菌操作.而表達載體質粒有可能出現突變等情況,所以可以在提出質粒之後,取少量質粒送測序,來確保序列的無誤.
大腸桿菌感受態細胞製備時的CaCl2濃度到底是多少
1 質粒dna的質量和濃度 用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的，轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比，但當加入的外源dna的量過多或體積過大時，則會使轉化率下降。一般地，dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5 1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。對於以質粒為載體的重...
大腸桿菌感受態細胞製備中，第八步中氯化鈣溶液中甘油的作用是什
菌種儲存採用甘油種結合超低溫 70 儲存的方法，即用無菌甘油懸浮工程菌，並使甘油終濃度為30 v v 所獲物即為工程菌的甘油種。低溫可使工程菌的生命活動處於非活躍狀態而能較長時間儲存細胞活力 減少基因變異，而30 的甘油可保護菌種的細胞膜系統在冷凍與解凍迴圈中不被破壞而起到保護作用。製作大腸桿菌感受...
為什麼製備好的感受態細胞放冰箱過夜後,轉化率會提高
剛製作完成的時候，轉化率最高。然後放入冰箱，只要凍融過，轉化率就會下降，並且隨著儲存時間的增加而下降。製備出來的感受態細胞在什麼時候做轉化最佳 當場做出來的，當時做轉化，轉化效率最高。儲存在 80冰箱的感受態，儲存40天以後，感受態效率會有明顯下降。經轉化的感受態細胞，塗完板後，還有剩餘的菌液，為什...