1樓：匿名使用者
鈣離子的作用是結合於細胞膜上，是細胞膜呈現一種液晶態。在冷熱變化刺激下液晶態的細胞膜表面會產生裂隙，使外源dna進入。
大腸桿菌感受態細胞製備為什麼要用cacl2處理細菌
2樓：阿魯巴星人
ca離子沉聚在細胞膜表面會使得細胞膜呈一種液晶的狀態，這種狀態便於在熱激條件下形成縫隙，便於轉化質粒。
用氯化鈣怎樣製備新鮮的大腸桿菌感受態細胞？
3樓：筆袋dc梞
這屬於專業問題啦 下面的簡單方案是clhen等(1972)所用方法的變通方案，常用於成批製備感受態細菌，這些細菌可使每微克螺旋質粒dna產生5x106-2x107 個轉化菌落，這樣的轉化效率足以滿足所有在質粒中進行的常規克隆的需要。該方法完全適用於大多數大腸桿菌菌株，並且比方案i快速，重複性更好。該法制備的感受態細胞可貯存於-70℃，但儲存時間過長會使轉化效率在一定程度上受到影響。
1、從於37℃培養16-20小時的新鮮平板中挑取一個單菌落(直徑2-3mm)，轉到一個含有100ml lb或sob培養基的1l燒瓶中。於37℃劇烈振搖培養約3小時(旋轉搖床，300轉/分)。為得到有效轉化，活細胞數不應超過108細胞/ml，可每隔 20-30分種測量od600值來監測培養物的生長情況。
在菌株與菌株之間，od600值和每毫升中活細胞數間的關係變化很大，因此有必要通過測量特定大腸桿菌菌株的生長增減物在生長週期的不同時相的od600值，並將各濃度的增減物鋪於無抗生素的lb瓊脂平皿以計算每一時相的活細胞數，從而使分光光度讀數得到標化。 2、在無菌條件下將細菌轉移到一個無菌、一次性使用的、用冰預冷的50ml聚丙烯管(falcon 2070)中，在冰上放置10分鐘，使培養物冷卻至0℃。切記：
下述所有步驟均需無菌操作。 3、於4℃用sorvall gs3轉頭(或與其相當的轉頭)以4000轉/分離心10分鐘，以**細胞。 4、倒出培養液，將管倒置1分鐘以使最後殘留的痕量培養液流盡。
5、以10ml用冰預冷的0.1mol/l cacl2重懸每份沉澱，放置於冰浴上。我們發現將1mol/l cacl2貯存液用純水(mille-q級或與其相當的級別)配製以10ml小份貯存於-20℃煞是方便。
製備感受態細胞時，取一小份融化，用純水稀釋至100ml，用nalgene濾器(0.45μm孔徑)過濾除菌，然後驟冷到0℃即可。對於大多數大腸肝菌菌株(除mc1061外)，在這一步採用tfb代替氯化鈣可得到相同的或更好的結果。
6、於4℃以4000轉/分離心10分鐘，以**細胞。 7、倒出培養液，將管倒置1分鐘以使最後殘留的痕量培養液流盡。 8、每50ml初始培養物用2ml用冰預冷的0.
1mol/l cacl2[或tfb，見步驟5，注]重懸每份細胞沉澱。此時，可將細胞分成小份，放於-70℃凍存。在這些條件下，儘管長期儲存後轉化效率會稍有下降，但細胞仍可保持處於感受態。
dagert和ehrlich(1979)曾表明細胞可以於4℃在cacl2溶液中儲存24-48小時，在貯存的最初12-24小時內，轉化效率增加3-5倍，然後降低到初始水平。 9、用冷卻的無菌吸頭從每種感受態細胞懸液中各取200μl轉移到無菌的微量離心管中，每管加dna(體積∞10μl，dna∞50ng)，輕輕旋轉以混勻內容物，在冰中放置30分鐘。 10、將管放到預加溫到42℃的迴圈水浴中放好的試管回上，恰恰放置90秒，不要搖動試管。
11、快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻1-2分鐘。 12、每管加800μl soc培養基。用水溶將培養基加溫至37℃，然後將管轉移到37℃搖床上，溫育45分鐘細菌復甦，並且表達質粒編碼的抗生素抗性標記基因。
如果要求更高的轉化效率，在復甦期中，應溫和地搖動細胞(轉速不超過225轉/分)。 13、將適當體積(每個90mm平板可達200μl)已轉化的感受態細胞轉移到含20mmol/l mgso4和相應抗生素的sob瓊脂培養基上。如培養物體積太小(〈10μl)。
可再加肉湯培養基，用一無菌的彎頭玻棒輕輕地將轉化的細胞塗到瓊脂平板表面。如在一個90mm平板上鋪200μl以上的感受態細胞，應離心濃縮細胞，然後用適量soc輕輕重懸細胞。如用四環素抗性作為選擇標記，全部的轉化混合物可以鋪在一個單獨的平皿上(或鋪在軟瓊脂中)。
然而如選用氨苄青黴素抗性，則只能將一部分培養物(根據實驗決定)鋪在單獨的平皿上。氨苄青黴素抗性功的增加與平皿上所加細菌數的增加並無線性比例關係，這可能是因為被抗生素殺死的細胞可釋放生長掏物質的緣故。 14、將平板置於室溫直至液體被吸收。
15、倒置平皿，於37℃培養，12-16小時後可出現菌落。如檢查氨苄青黴素抗性，用轉化細胞鋪增板時密度較低(每個90mm平板不超過104菌落)，於37℃培養平板時不應超過20小時。氨苄青黴素抗性的轉化可將β-內醯胺酶分泌到培養基中，迅速滅活菌落周圍區域中的抗生素。
這樣，鋪平板時密度太高或培養時間太長都會導致出現對氨苄青黴素敏感的衛星菌落。在選擇培養基中不用氨苄青黴素而改用羧苄青黴素，以及將抗生素濃度從60μg/ml增至100μg/ml，可使情況有所改善，但不能徹底**之。
感受態細胞的製備和轉化中 為什麼要加兩次cacl2？cacl2為什麼要預冷
4樓：就喜歡理財
方法一： 細菌轉化的方法多以mendel和higa（1970）的發現為基礎，其基本方法是用冰預冷的cacl2或多種2價陽離子等處理細菌，使之進入感受態得以轉化。 用cacl2製備新鮮或冷凍的大腸桿菌感受態細胞，常用於成批製備感受態細菌。
感受態細胞製備中，加了兩次氯化鈣，它們的作用分別是什麼？
5樓：海貝兒
除了增加細胞通透性之外，第一次還有洗淨之前一步殘留的lb液體的作用
大腸桿菌感受態細胞製備中，第八步中氯化鈣溶液中甘油的作用是什
菌種儲存採用甘油種結合超低溫 70 儲存的方法，即用無菌甘油懸浮工程菌，並使甘油終濃度為30 v v 所獲物即為工程菌的甘油種。低溫可使工程菌的生命活動處於非活躍狀態而能較長時間儲存細胞活力 減少基因變異，而30 的甘油可保護菌種的細胞膜系統在冷凍與解凍迴圈中不被破壞而起到保護作用。製作大腸桿菌感受...
驗證感受態細胞轉化效率時為什麼用puc19質粒
因為質粒小，好轉染 而且大家都用它，已經作為一個標準了 質粒轉化感受態細胞的原理是什麼 原理，感 不對,通過轉化到感受態細菌 中,不是細胞.感受態的大腸桿菌,可以自己製作也可以通過購買.之後將細菌凃到含有抗生素的板子上,長出克隆後挑取單克隆,將單克隆加入含有抗生素的細菌培養基中培養,之後提取質粒,提...
為什麼製備好的感受態細胞放冰箱過夜後,轉化率會提高
剛製作完成的時候，轉化率最高。然後放入冰箱，只要凍融過，轉化率就會下降，並且隨著儲存時間的增加而下降。製備出來的感受態細胞在什麼時候做轉化最佳 當場做出來的，當時做轉化，轉化效率最高。儲存在 80冰箱的感受態，儲存40天以後，感受態效率會有明顯下降。經轉化的感受態細胞，塗完板後，還有剩餘的菌液，為什...