1樓：手機使用者
1)fitc
2)rb200
3)tritc
4）鑭系：eu、抄tb
5)pe
6）其它
常見熒光素的特性bai
1)fitc：黃色結晶
du粉末，吸收光：490~495nm，發射zhi光：520~530nm，明dao亮的黃綠色熒光。
2)rb200：橘紅色粉末，吸收光570nm，發射光595~600nm，橘紅色熒光。
3)tritc：紫紅色粉末，吸收550nm，發射光620nm，橙紅色熒光。
4）鑭系：eu、tb
5)pe：吸收光490~560nm，發射光595nm，紅色熒光。
6）其它：酶作用後產生熒光物質。 酶 底物 產物 激發光 發射光β-g mug mu 360 450
ap mup mu 360 450
hrp hpa 二聚體 317 414
⑷合適熒光素的選擇
1）具有與蛋白質形成共價鍵的化學基團。
熒光素-n=c +nh-蛋白質 熒光素-n-c-n-蛋白質‖ ︱ ︱‖ ︱
s h h sh
2）熒光效率高，標記後下降不明顯。
3）熒光色澤與背景色澤對比鮮明。
4）標記後能保持生物學活性和免疫活性
5）標記方法簡單、快速。
6）安全無毒
共定位(免疫熒光)是什麼？
2樓：糟油酒丸
免疫熒光可以bai用於共定位du，但也可以用於很zhi多其他應用。共定dao位不能夠說是免疫專熒光的主要用途。
一樓回答有屬助於理解共定位，但是「加上紅色/綠色熒光蛋白的標籤」這種說法並不是免疫熒光的做法。在免疫熒光中，與目標蛋白相結合的是帶有熒光分子基團的抗體，此種抗體雖然發熒光，但不稱為熒光蛋白。
另外，共定位不能夠用於證明相互作用，更不可能證明蛋白之間的共價結合。
共定位就如字面意思上所說的，只能夠表明蛋白a和b都在此細胞有表達，並且在同樣的細胞內位置/細胞器。
就好像你用gps看到，有兩個人a和b此時都在某市同一家咖啡廳內，並不能夠證明他們在幽會。但是如果說因為同時在一處這個事實而懷疑有姦情，也並不全是毫無道理，只是需要別的手段來證明罷了。
3樓：糟油酒丸
免疫熒copy光可以用於共定位，但也可以用於很多其他應用。共定位不能夠說是免疫熒光
的主要用途。
一樓回答有助於理解共定位，但是「加上紅色/綠色熒光蛋白的標籤」這種說法並不是免疫熒光的做法。在免疫熒光中，與目標蛋白相結合的是帶有熒光分子基團的抗體，此種抗體雖然發熒光，但不稱為熒光蛋白。
另外，共定位不能夠用於證明相互作用，更不可能證明蛋白之間的共價結合。
共定位就如字面意思上所說的，只能夠表明蛋白a和b都在此細胞有表達，並且在同樣的細胞內位置/細胞器。
就好像你用gps看到，有兩個人a和b此時都在某市同一家咖啡廳內，並不能夠證明他們在幽會。但是如果說因為同時在一處這個事實而懷疑有姦情，也並不全是毫無道理，只是需要別的手段來證明罷了。
4樓：du知道君
免疫熒光可以用於共定位，但也可以用於很多其他應用。共定位不能專夠說是免疫熒光的主要用途。屬 一樓回答有助於理解共定位，但是「加上紅色/綠色熒光蛋白的標籤」這種說法並不是免疫熒光的做法。
在免疫熒光中，與目標蛋白相結合的是帶有熒光分子基團的抗體，此種抗體雖然發熒光，但不稱為熒光蛋白。 另外，共定位不能夠用於證明相互作用，更不可能證明蛋白之間的共價結合。 共定位就如字面意思上所說的，只能夠表明蛋白a和b都在此細胞有表達，並且在同樣的細胞內位置/細胞器。
就好像你用gps看到，有兩個人a和b此時都在某市同一家咖啡廳內，並不能夠證明他們在幽會。但是如果說因為同時在一處這個事實而懷疑有姦情，也並不全是毫無道理，只是需要別的手段來證明罷了。
如何做好免疫熒光
5樓：南京金益柏生物科技****
免疫熒光是標記免疫技術發展最早的一種，它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術，通過將抗體與一些示蹤物質結合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。免疫熒光步驟包括，細胞固定和通透，封閉，孵育一抗，二抗等。除了這些基本步驟，以下建議可以幫助您獲得更好的實驗結果。
1、細胞固定和通透
為達到最佳的檢測效果，細胞需要經過固定和通透。這些步驟非常關鍵，細胞和抗原需要保證最佳的結構，並利於抗體與抗原結合。通常情況下，需要通過以下步驟得以實現：
細胞用2%-4%多聚甲醛固定，之後用0.1%皁角苷或0.02%的triton x-100進行通透。
前者是比較溫柔的處理，但是對於核內抗原可能無效，需要用到triton。使用皁角苷進行通透時，要注意它會引起細胞膜的可逆性通透，也就是除了在通透初期，在每個抗體孵育環節都需要進行通透。另外，細胞可以用冰甲醇進行同時固定和通透，可以避免去垢劑的使用。
2、抗體特異性
免疫熒光需要用到特異性非常強的抗體，可以避免高背景和不理想的蛋白定位結果。在大多數情況下，純化抗體的效果很好，但是正確的對照可以幫助精準定位抗原。使用只有二抗染色的**作為陰性對照，有利於減少降低背景干擾。
3、合適的抗體稀釋比例
通過優化抗體稀釋比例來優化染色，通常情況下1ug/ml的純化抗體或者1:100-1:1000的抗血清足夠達到特異性染色的結果。
但在能保證低背景染色的前提下，可以通過增加濃度來提高訊號強度。如果是第一次使用該抗體或測定某抗原，強烈建議濃度梯度實驗。
4、優化緩衝液和封閉劑
儘管很多抗原在常見的buffer如pbs中可以很好的被染色，但是對於某些目的抗原，更換一下含有不同離子的緩衝液，比如鈣、鎂、鉀等，可以帶來很大程度上的改善。rockland可提供優化過的ihc用封閉緩衝液，同樣適用於熒光染色實驗。
5、選擇正確的二抗
如果您需要做免疫實驗，我們強烈建議您選擇進行過預吸附的二抗進行單染實驗；如果是雙重甚至是多重染色，那麼必須使用預吸附的二抗。同時，請優先選擇來自同一物種的二抗。
6、使用合適的細胞密度
選擇合適的細胞數量進行染色，當細胞數量過多時，細胞結構不好，導致染色背景深，低細胞密度，會使細胞貼壁不佳，狀態不好。
7、多重染色
對同一樣本進行兩個不同抗原的檢測時，可以用各自的抗體進行同時染色，但要求兩個一抗的種屬**不同，標記物不同，而二抗的種屬**需保持一致。
8、降低背景
高背景是免疫熒光常見的問題，解決此問題可以用二抗**的正常血清代替bsa做封閉液，降低抗體濃度，增加洗滌次數，洗滌至少三次，每次五分鐘，推薦洗滌液為pbs+0.05%tween。
9、封片
作為免疫熒光的最後一步，可以提高折射率，保護樣品。
10、資料分析
觀察整體樣片時，選擇具有代表性的細胞進行資料獲取與分析。
我的熒光免疫染色出了什麼問題
免疫熒光的方法有什麼注意環節
6樓：南京金益柏生物科技****
1、冰凍切片製備：建議用新鮮組織，否則組織細胞內部結構破壞，易使抗原彌散。選用乾淨鋒利的刀片、組織一定要冷凍適度等，防止裂片和脫片嚴重。
2、組織切片固定：切好片風乾後立即用冰丙酮等固定液進行固定 5-10 min，尤其要較長時間儲存的白片，一定要及時固定和適當儲存。
3、血清封閉：為防止內源性非特異性蛋白抗原的結合，需要在一抗孵育前先用血清（與二抗**一致）封閉，減弱背景著色。血清封閉的時間是可以調整的，一般 10-30 min。
5、二抗孵育條件：二抗一般室溫或 37℃ 立即觀察，若將標本放在聚乙烯塑料袋中 4℃ 30 min-1h，具體時間需要摸索，而濃度一般有工作液，若是濃縮液還要摸索濃度，切記要避光反應。但在免疫熒光中我們一般先把二抗濃度和孵育時間先定下，然後去摸索一抗濃度和孵育時間。
最後，熒光素標記的二抗隨著儲存時間的延長，可能後有大量的遊離熒光素殘留，需要注意配製時小包裝和並進行適當的離心。
6、復染：目的是形成細胞輪廓，從而更好地對目標蛋白進行定位。一般常用 dapi 復染。
7、封片：為了長期儲存，我們一般用緩衝甘油等封片，此外還有專門的抗熒光萃滅封片液。避免產生氣泡，方法是直接在載玻片組織上滴一滴封片液，然後一手拿住蓋片某一拐角，而另一手拿對面的那個拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接觸到液體時為止；當發現液體接觸面在不斷彌散時，則可以緩慢降低另一拐角，這樣一般不會產生氣泡。
8、切片清洗：為了防止一抗、二抗等試劑殘留而引起非特異性染色，所以適當地加強清洗（延長時間和增多次數）尤為重要，我一般在一抗孵育前的清洗是 3 min*3 次，而一抗孵育後的清洗均為 5 次*5 min。注意：
單獨沖洗，防止交叉反應造成汙染。溫柔沖洗，防止切片的脫落。我喜歡用浸洗方式；沖洗的時間要足夠，才能徹底洗去結合的物質。
pbs 的 ph 和離子強度的使用和要求。這方面我有慘痛教訓，當時我買的抗體稀釋液偏酸，結果背景一片黃（未見特異性染色），建議 ph 在 7.4-7.
6 濃度是 0.01 m。（中性及弱鹼性條件（ph7-8）有利於免疫複合物的形成，而酸性條件則有利於分解；低離子強度有利於免疫複合物的形成，而高離子強度則有利於分解）
9、拍照：有條件的話最好立即拍照，若不能及時拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和溼度。使用熒光顯微鏡注意嚴格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進行操作，不要隨意改變程式；應在暗室中進行檢查；防止紫外線對眼睛的損害，在調整光源時應戴上防護眼鏡；檢查時間每次以1~2 h 為宜，超過 90 min，超高壓汞燈發光強度逐漸下降，熒光減弱；標本受紫外線照射 3~5 min 後，熒光也明顯減弱或褪色；激發光長時間的照射，會發生熒光的衰減和淬滅現象；所以最多不得超過 2~3 h；熒光顯微鏡光源壽命有限，標本應集中檢查，以節省時間，保護光源。
天熱時，應加電扇散熱降溫，新換燈泡應從開始就記錄使用時間。燈熄滅後欲再啟用時，須待燈光充分冷卻後才能點燃。一天中應避免數次點燃光源。
關閉汞燈至少在開啟 15-30 分鐘後；標本染色後立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標本放在聚乙烯塑料袋中 4℃ 儲存，可延緩熒光減弱時間，防止封裱劑蒸發；使用的玻片等載體，都必須厚度均勻，無明顯的自發熒光，如果使用油鏡，還必須保證鏡油為無熒光鏡油；電源最好裝穩壓器，否則電壓不穩不僅會降低汞燈的壽命，也會影響鏡檢的效果。
免疫熒光和免疫電鏡有何異同,免疫熒光和免疫酶組化的區別
相同點 兩者都是應用免疫組織化學的原理，標記並檢查組織中的目的蛋白 抗 原 不同點 免疫熒光技術是用帶有熒光的抗體去標記和檢測目的蛋白 抗原 標記後用熒光顯微鏡觀察。屬於光鏡 細胞水平的觀測 免疫電鏡技術，是使用帶有過氧化物酶或金顆粒的抗體去標記組織中目的蛋白，進而製成電鏡標本，最終用電子顯微鏡觀察...
免疫熒光的標本怎麼製作,免疫熒光染色的詳細步驟及應注意的細節
免疫熒光的標本製作的基本程式和dab顯色的組化類似 1 免疫熒光不需要使用雙氧水處理，封閉和一抗孵育與其它相同2 免疫熒光的二抗使用不同熒游標記的二抗孵育，孵育時間根據抗體的工作濃度確定 3 二抗孵育之後充分洗片後即可貼片 封片和觀察4 免疫熒光在封片使用專用封片劑 如果你經費比較充足 或甘油 0....
求助免疫熒光的結果分析,求助免疫熒光PI染核問題
可以用image pro plus分析灰度 求助免疫熒光pi染核問題 細胞試驗指南上dapi染核是在孵育完二抗之後，估計pi也可以在這時加。在論壇中查到的濃度不一，有10 50 m，有5ug 20ug ml,作用時間有5 30min不等，染完後pbs洗3遍，封片。用535 nm激發波長，615 nm...