1樓：匿名使用者
定量反轉錄pcr技術，通過該技術反映出rna載量
什麼是realtime pcr，什麼是q-pcr，所用反應物質與普通pcr有何不同
2樓：任羿
由於pcr敏感性高，擴增產物總量變異係數大，定量不準確。90年代末期出現了q-pcr， 利用熒光檢測pcr儀繪製dna擴增過程中的累積速率動態變化圖，基本消除在測定終端產物丰度時變異係數較大的問題。混合在pcr反應液中的熒光探針只有與雙鏈dna結合後，才能夠被激發出熒光。
隨著新合成dn**段的增加，由於結合到dna上的熒光探針增加，被激發產生的熒光相應增加。
為確保熒光檢測的確實是靶dna，又設計了僅能與目的dna特異結合的熒光探針。taqman探針是一段與靶dna序列中間部位結合的單鏈dna，長50bp-150bp，該dna的5』和3』端帶有短波長和長波長兩個不同熒光基團，由於彼此距離靠近，在熒光共振能量轉移（fret）作用下發生熒光淬滅，因而檢測不到熒光。隨著pcr反應的進行，taqman 探針結合到目的dna序列上，並且會被具有外切酶活性的taq dna聚合酶逐個切除而降解。
切下來的熒光基團解除了熒光淬滅的束縛，會在激發光下發出熒光，因此，產生的熒光強度直接反映了所擴增靶dna的總量。
實時定量pcr的引數:ct值
ct值是產物熒光強度首次超過設定閾值時，pcr反應所需的迴圈數。實時定量pcr可定量比較各樣本之間待檢測靶dna多少，顯示的是各樣本之間的相對含量。利用標準曲線，可以確定樣品中待檢測靶dna的絕對含量。
以上是我們上課課件上的內容。反應物質的話，就是多加了熒光染料。real time q-pcr就是實時定量pcr。
3樓：匿名使用者
所謂real-time q-pcr技術，是指在pcr反應體系中加入熒光基團，利用熒光訊號累積實時監測整個pcr程序，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。利用熒光訊號的變化實時檢測pcr擴增反應中每一個迴圈擴增產物量的變化,通過ct值和標準曲線的分析對起始模板進行定量分析。
pcr,rt-pcr,實時熒光定量pcr的區別與聯絡
4樓：永恆的瞬間綻放
1、所說的pcr應該就是最常規的pcr，以dna為模板，通過上下游引物，實現dna的擴增。
2、rt-pcr一般情況下是指反轉錄pcr（reverse transcription），儘管有些資料上說實時熒光定量pcr也（realtime fluores-cence quantitative pcr）也簡稱rt-pcr，但是這是不對的，不推薦。
基本操作過程是將所提取的rna進行反轉錄，然後將所獲得的cdna作為模板，設計引物進行擴增，是一種檢測基因表達的常用方法。
3、實時熒光定量pcr也就是real-time pcr，其最大的作用是檢測樣品中的初始dna濃度。
至於三者的關係，rt-pcr和實時定量pcr應該都屬於pcr，在rna實驗中，這二者都會應用到。
例如你要比較2個組織中的某基因的表達差異，首先你要提取2個組織的總rna，然後通過rt-pcr檢測該基因是否在2個組織中有表達，然後通過實時定量pcr測定該基因在2個組織中的表達量是否具有顯著性差異。
擴充套件資料：
pcr原理
dna的半保留複製是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈dna在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在dna聚合酶的參與下，根據鹼基互補配對原則複製成同樣的兩分子拷貝。
在實驗中發現，dna在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制dna的變性和復性，加入設計引物，dna聚合酶、dntp就可以完成特定基因的體外複製。
但是，dna聚合酶在高溫時會失活，因此，每次迴圈都得加入新的dna聚合酶，不僅操作煩瑣，而且**昂貴，制約了pcr技術的應用和發展。
耐熱dna聚合酶-taq酶的發現對於pcr的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個迴圈加酶，使pcr技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，pcr技術得以大量應用，並逐步應用於臨床。
pcr技術的基本原理類似於dna的天然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。pcr由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構成：
①模板dna的變性：模板dna經加熱至93℃左右一定時間後，使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；
②模板dna與引物的退火（復性）：模板dna經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合；
③引物的延伸：dna模板-引物結合物在72℃、dna聚合酶（如taqdna聚合酶）的作用下，以dntp為反應原料，靶序列為模板，按鹼基互補配對與半保留複製原理，合成一條新的與模板dna鏈互補的半保留複製鏈，重複迴圈變性-退火-延伸三過程就可獲得更多的「半保留複製鏈」，
而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
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