做qpcr,相同的標本為什麼每次做結果不同

2021-03-03 20:32:47 字數 1578 閱讀 1563

1樓:匿名使用者

注意操作的一致性以及穩定性,一般情況下不同批次是有批間差的,但是實驗流程相對比較成熟的實驗室,或者老師批間差不會很大,我們實驗室要求相同樣本批間差在0.2cycle以內。建議你多做幾組重複。

pcr實驗室汙染了怎麼處理?

2樓:北京索萊寶科技****

出現汙染後,我們首先考慮可能是試劑的汙染,更換新批號的hbv試劑重新檢測後,結果仍為全部標本陽性。

將hbv標本拿到其他正規的pcr實驗室檢測,結果標本中陰、陽性結果都有,陰性對照是陰性,陽性對照是陽性,說明標本沒有被汙染將兩種批號的hbv試劑拿到其他正規的pcr實驗室檢測,也顯示試劑沒有問題。

我實驗室用消毒液擦拭工作臺面後,開啟所有的紫外燈照射一天,將所使用微量進樣器、離心管、槍頭、手套、記號筆、記錄本等都更換掉,再將hbv標本進行檢測,結果全部標本仍然為陽性。

用消毒液擦拭工作臺面後,開啟所有的紫外燈照射一天,將hbv標本重新檢測,同時設定了兩個陰性對照(a和b),a 陰性對照為將試劑的反應管從試劑盒中拿,開啟反應管的蓋子,在空氣中暴露10 min,蓋上蓋子,上機檢測;b陰性對照為將試劑的反應管從試劑盒中拿,不開蓋子,直接上機檢測。結果是全部標本和a陰性對照為陽性,而b陰性對照為陰性。

至此,雖然還查詢不到汙染源是什麼,但有一點可以肯定,pcr實驗室汙染是氣溶膠擴散而引起的後來經過調查,發現汙染是由於本室工一位工作人員在打掃實驗室衛生時,用擴增區的掃笤和拖把打掃了標本製備區的衛生引起。

在確定了汙染的原因後,我們就開始著手排除汙染,每天都開啟整個pcr 實驗室的門窗和排氣扇,讓整個實驗室通風,用消毒液擦拭整個pcr實驗室,開啟所有的紫外燈照射。

每隔3 d按3.5步驟檢測一次,一直這樣處理了一個月,a陰性對照才轉為陰性。連續檢測三次a和b陰性對照,每次結果都均為陰性,才確定pcr實驗室恢復正常。

通常我們對pcr實驗室汙染的預防是採取隔離不同操作區、分裝試劑、改進實驗操作等規則,對汙染的處理是用稀鹽酸擦拭或浸泡;紫外線照射法等 ]。而對於實驗室的通風方面沒有給予足夠的重視,為了防止實驗區間之間的相互汙染,各個實驗區間都是儘可能的密閉,從而使得實驗室出現pcr產物殘留汙染的機率增大。從本次pcr實驗室汙染排除的過程來看.我覺得汙染得以排除的一個關鍵是通風。

適當的給予實驗室通風,可起到空氣稀釋的作用,有利於pcr產物殘留量的減少,加快實驗室汙染的排除。

3樓:廣州雙螺旋基因技術****

a. 實驗室進行通風處理,至少2 周的時間;

通風可加速擴增產物的消散的速度

b. 使用清水對實驗檯面、實驗室進行清洗;

dna不溶於酒精,使用清水多次擦拭後可消除附在實驗檯面等的核酸dna;

c. 使用紫外燈進**間的照射;

紫外線及產生的臭氧都有破壞dna結構的作用d. 之前使用的滅菌鍋使用清水清洗多次,不要和耗材等在一起滅菌;

e. 可用1mol/l 的鹽酸對可疑器具或者實驗檯面進行浸泡或擦拭。

鹽酸可使dna脫嘌呤,破壞dna的結構。

f. 若有條件,選擇一個新的實驗環境進行檢測實驗最好。

4樓:南京金益柏生物科技****

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