麻煩大神詳細分析一下這個westernblot圖

2021-03-03 20:27:08 字數 1335 閱讀 9324

1樓:匿名使用者

vector那一列是對照,flag-那一列是樣品。隨著時間的變化,在對照和樣品間蛋白表達量的變化。其中alpha-tublin是內參,表示在樣品和對照間,其他無關蛋白的量並不隨著時間點不同產生變化,所以如果有不同,就是由於時間造成的。

western blot圖中,ip ib flag ha是什麼意思

2樓:匿名使用者

ib是免疫印記、ip是免疫共沉澱、flag和ha都是一種蛋白標籤

從最右邊看,表示細胞再轉染了這三種質粒後,能夠在細胞中表達,最左邊的圖是用帶有flag標籤的vegfr拉p85及其研究片段,從圖中可以看出,p85被拉出,而其研究片段沒有被拉出,中間的圖是反過來用p85及其研究片段拉vegfr,同樣可以看出p85可以把vegfr拉出,而其研究片段沒有被拉出,結論是vegfr與p85存在相互作用,但是相互作用的位點不在其sh2上

westernblot 膜幹了怎麼辦?

3樓:匿名使用者

膜幹了以後可以通過浸泡甲醇恢復,轉膜過程發生幹膜也可以這樣,但是會對結果有一定影響。就像樓上說的,孵育過抗體再晾乾就不能strip了,一般stripping 試劑盒說明書都有強調這個。如果要儲存膜可以浸泡在pbs或tbs中,4度放置。

注意:上過抗體的膜最好不要晾乾,可能會導致無法strip。

4樓:霓裳嵐嵐

如果是pvdf膜就沒事,你掃描了麼?有時候膜幹了條帶更清楚。如果是硝酸纖維素膜就有點麻煩,因為幹了一碰就碎,不知道你是不是用拍照的。

5樓:陳墨徹汗卯

個人建議時間不要再長了,再長蛋白有可能變性造成後續實驗無法進行。我原來遇到這類問題是用以下幾種方法嘗試解決的,你也可以嘗試一下

(1)檢查一下你的三明治結構夾的怎麼樣,尤其是膜及濾紙的邊緣是不是有短接的地方,這個是最容易出現的問題。另外膜和膠之間是不是有氣泡,不推薦用外力去擀壓膜和膠,推薦用緩衝液潤溼膜和膠之後,像做切片蓋蓋玻片一樣從一邊蓋下趕出氣體。要絕對確保沒有短接和氣泡,不然很容易出現轉膜不完全的問題。

(2)換成恆壓的試試,這個方案我不知道原理是什麼,但是有的時候確實能夠解決問題。

(3)換成半乾轉的方法,但是注意半乾轉更要確保沒有短接氣泡,而且時間不能過長,半乾轉的發熱量很大。我不清楚你的蛋白是不是需要活性,如果遇熱失活那就不能用這種方法。

(4)這個方法比較浪費,看老闆讓不讓你用了。換成品緩衝液商品,西格瑪的比較好。另外換24層濾紙成品,用一次不要再使用第二次。

還有就是還一個牌子的膜,我們實驗室曾經遇到過一個牌子的膜完全轉不出來的現象。

以上,希望你的問題早日能夠解決。

請幫忙詳細分析一下題目

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請高人看看這個,詳細分析一下謝謝甲子丁丑乙丑辛

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