1樓：手機使用者
檢測目標基因活性
在保持組蛋白和dna聯合的同時，染色質被切成很小的片斷，通過運用對應於一個特定組蛋白標記的生物抗體，將目標片段（組蛋白髮生特異標記的片段）沉澱下來。ip 是利用抗原蛋白質和抗體的特異性結合以及細菌蛋白質的「protein a」特異性地結合到免疫球蛋白的fc片段的現象活用開發出來的方法（免疫磁珠結合proteina，proteina結合抗體fc段，抗體結合抗原即發生特異標記的組蛋白，這裡要注意組蛋白是和dna結合的，這樣就把目標組蛋白和dna的符合物沉澱下來了）。在將組蛋白與dna分離，用獲得的dna去做western blot ，從而檢測那些基因的組蛋白髮生了修飾。
檢測已知蛋白的靶基因
在生理狀態下把細胞內的蛋白質和dna交聯在一起，超聲波將其打碎為一定長度範圍內的染色質小片段，然後通過所要研究的目的蛋白質特異性抗體沉澱此複合體，特異性地富集目的蛋白結合的dn**段，通過對目的片斷的純化與檢測，從而明確蛋白與哪些基因相互作用。
目前多用精製的protein a預先結合固化在argarose的beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應後，beads上的prorein a就能吸附抗原達到精製的目的。實驗最需要注意點就是抗體的性質。抗體不同和抗原結合能力也不同，免染能結合未必能用在ip反應。
建議仔細檢查抗體的說明書。特別是多抗的特異性是問題。其次，要注意溶解抗原的緩衝液的性質。
多數的抗原是細胞構成的蛋白，特別是骨架蛋白，緩衝液必須要使其溶解。為此，必須使用含有強介面活性劑的緩衝液，儘管它有可能影響一部分抗原抗體的結合。另一面，如用弱介面活性劑溶解細胞，就不能充分溶解細胞蛋白。
即便溶解也產生與其它的蛋白結合的結果，抗原決定族被封閉，影響與抗體的結合，即使ip成功，也是很多蛋白與抗體共沉的悲慘結果。再次，為防止蛋白的分解，修飾，溶解抗原的緩衝液必須加蛋白每抑制劑，低溫下進行實驗。每次實驗之前，首先考慮抗體/緩衝液的比例。
抗體過少就不能檢出抗原，過多則就不能沉降在beads上，殘存在上清。緩衝劑太少則不能溶解抗原，過多則抗原被稀釋。
求做染色質免疫共沉澱的原理和大致步驟
2樓：匿名使用者
利用識別特定
蛋白的抗體，捕獲與此蛋白相互作用的核酸。特定蛋白多半是能夠與核酸結合的，轉錄因子，調控原件等等，而抗體可以是識別不同修飾的蛋白，例如乙醯化什麼的，用於轉錄調控，表觀遺傳學研究等等
抗體掛到固相支援物上（磁珠或瓊脂糖），製備親和純化柱對細胞進行甲醛交聯，固定蛋白與核酸的結合物將蛋白核酸複合物抽提出來，再將染色質片段通過超聲或酶解，打斷成小片段將此小片段加到制好的親和純化柱上孵育
將未結合物質洗去
將目標蛋白核酸複合物洗脫收集
蛋白酶k加熱解交聯
純化核酸
根據需要進行qpcr或者是測序，晶片等
染色質免疫共沉澱的chip-seq
3樓：驗證碼つ槅
染色質免疫共沉澱技術（chromatin immunoprecipitation，chip）也稱結合位點分析法，是研究體內蛋白質與dna相互作用的有力工具，通常用於轉錄因子結合位點或組蛋白特異性修飾位點的研究。將chip與第二代測序技術相結合的chip-seq技術 ，能夠高效地在全基因組範圍內檢測與組蛋白、轉錄因子等互作的dna區段。
chip-seq的原理是：首先通過染色質免疫共沉澱技術（chip）特異性地富集目的蛋白結合的dn**段，並對其進行純化與文庫構建；然後對富集得到的dn**段進行高通量測序。研究人員通過將獲得的數百萬條序列標籤精確定位到基因組上，從而獲得全基因組範圍內與組蛋白、轉錄因子等互作的dna區段資訊。
染色質免疫共沉澱只能用活細胞做嗎
4樓：匿名使用者
染色質免疫共沉澱只能用活細胞做，因為這樣檢測的精確性更高。
染色質免疫共沉澱技術的原理是在保持組蛋白和dna聯合的同時，通過運用對應於一個特定組蛋白標記的生物抗體，染色質被切成很小的片斷，並沉澱下來。在過去十年已經成為表觀遺傳資訊研究的主要方法。這項技術幫助研究者判斷在細胞核中基因組的某一特定位置會出現何種組蛋白修飾。
chip不僅可以檢測體內反式因子與dna的動態作用，還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達的關係。近年來，這種技術得到不斷的發展和完善。採用結合微陣列技術在染色體基因表達調控區域檢查染色體活性，是深入分析癌症、心血管疾病以及**神經系統紊亂等疾病的主要通路的一種非常有效的工具。
染色質免疫共沉澱的介紹
5樓：攻°岑y5沉
染色質免疫共沉澱技術的原理是在保持組蛋白和dna聯合的同時，通過運用對應於一個特定組蛋白標記的生物抗體，染色質被切成很小的片斷，並沉澱下來。這項技術主要用來分析目標基因有沒有活性、或者分析一種已知蛋白**錄因子）的靶基因有哪些。
染色質免疫共沉澱（chip）是怎麼回事？
6樓：
真核生物的基因組dna以染色質的形式存在。因此，研究蛋白質與dna在染色質環境下的相互作用是闡明真核生物基因表達機制的基本途徑。染色質免疫沉澱技術（chromatin immunoprecipitation assay, chip）是目前唯一研究體內dna與蛋白質相互作用的方法。
它的基本原理是在活細胞狀態下固定蛋白質－dna複合物，並將其隨機切斷為一定長度範圍內的染色質小片段，然後通過免疫學方法沉澱此複合體，特異性地富集目的蛋白結合的dn**段，通過對目的片斷的純化與檢測，從而獲得蛋白質與dna相互作用的資訊。chip不僅可以檢測體內反式因子與dna的動態作用，還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達的關係。而且，chip與其他方法的結合，擴大了其應用範圍：
chip與基因晶片相結合建立的chip-on-chip方法已廣泛用於特定反式因子靶基因的高通量篩選；chip與體內足跡法相結合，用於尋找反式因子的體內結合位點；rna-chip用於研究rna在基因表達調控中的作用。由此可見，隨著chip的進一步完善，它必將會在基因表達調控研究中發揮越來越重要的作用。
染色體免疫共沉澱（chromatin immunoprecipitation，chip）是基於體內分析發展起來的方法，也稱結合位點分析法，在過去十年已經成為表觀遺傳資訊研究的主要方法。這項技術幫助研究者判斷在細胞核中基因組的某一特定位置會出現何種組蛋白修飾。chip不僅可以檢測體內反式因子與dna的動態作用，還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達的關係。
近年來，這種技術得到不斷的發展和完善。採用結合微陣列技術在染色體基因表達調控區域檢查染色體活性，是深入分析癌症、心血管疾病以及**神經系統紊亂等疾病的主要代謝通路的一種非常有效的工具。
它的原理是在保持組蛋白和dna聯合的同時，通過運用對應於一個特定組蛋白標記的生物抗體，染色質被切成很小的片斷，並沉澱下來。ip是利用抗原蛋白質和抗體的特異性結合以及細菌蛋白質的「prorein a」特異性地結合到免疫球蛋白的fc片段的現象活用開發出來的方法。目前多用精製的prorein a預先結合固化在argarose的beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應後，beads上的prorein a就能吸附抗原達到精製的目的。
實驗最需要注意點就是抗體的性質。抗體不同和抗原結合能力也不同，免染能結合未必能用在ip反應。建議仔細檢查抗體的說明書。
特別是多抗的特異性是問題。其次，要注意溶解抗原的緩衝液的性質。多數的抗原是細胞構成的蛋白，特別是骨架蛋白，緩衝液必須要使其溶解。
為此，必須使用含有強介面活性劑的緩衝液，儘管它有可能影響一部分抗原抗體的結合。另一面，如用弱介面活性劑溶解細胞，就不能充分溶解細胞蛋白。即便溶解也產生與其它的蛋白結合的結果，抗原決定族被封閉，影響與抗體的結合，即使ip成功，也是很多蛋白與抗體共沉的悲慘結果。
再次，為防止蛋白的分解，修飾，溶解抗原的緩衝液必須加蛋白每抑制劑，低溫下進行實驗。每次實驗之前，首先考慮抗體/緩衝液的比例。抗體過少就不能檢出抗原，過多則就不能沉降在beads上，殘存在上清。
緩衝劑太少則不能溶解抗原，過多則抗原被稀釋。
染色質免疫共沉澱的一般流程
7樓：永恆組
chip 的一般流程：
甲醛處理細胞---收集細胞，超聲破碎---加入目的蛋白的抗體，與靶蛋白-dna複合物相互結合---加入proteina，結合抗體-靶蛋白-dna複合物，並沉澱---對沉澱下來的複合物進行清洗，除去一些非特異性結合---洗脫，得到富集的靶蛋白-dna複合物---解交聯，純化富集的dna-片斷---pcr分析。
在pcr分析這一塊，比較傳統的做法是半定量-pcr。但是現在隨著熒光定量pcr的普及，大家也越來越傾向於q-pcr了。此外還有一些由chip衍生出來的方法。
例如rip（其實就是用chip的方法研究細胞內蛋白與rna的相互結合，具體方法和chip差不多，只是實驗過程中要注意防止rnase，最後分析的時候需要先將rna逆轉錄成為cdna）；還有chip-chip（其實就是chip富集得到的dna-片段，拿去做晶片分析，做法在chip的基礎上有所改變，不同的公司有不同的做法，要根據公司的要求來準備樣品）。
具體操作流程：
第一天：
（一）、細胞的甲醛交聯與超聲破碎。
1、取出1平皿細胞（10cm平皿），加入243 ul 37%甲醛，使得甲醛的終濃度為1%（培養基共有9ml）。
2、37攝氏度孵育10min。
3、終止交聯：加甘氨酸至終濃度為0.125m。450 ul 2.5m甘氨酸於平皿中。混勻後，在室溫下放置5min即可。
4、吸盡培養基，用冰冷的pbs清洗細胞2次。
5、細胞刮刀收集細胞於15ml離心管中（pbs依次為5ml，3ml和3ml）。預冷後2000rpm 5min收集細胞。
6、倒去上清。按照細胞量，加入sds lysis buffer。使得細胞終濃度為每200ul含2×106個細胞。
這樣每100ul溶液含1×106個細胞。再加入蛋白酶抑制劑複合物。假設mcf7長滿板為5×106個細胞。
本次細胞長得約為80%。即為4×106個細胞。因此每管加入400ul sds lysis buffer。
將2管混在一起，共800ul。
7、超聲破碎：vcx750，25%功率，4.5s衝擊，9s間隙。共14次。
（二）、除雜及抗體哺育。
8、超聲破碎結束後，10000g 4℃離心10min。去除不溶物質。
留取300ul做實驗，其餘儲存於-80℃。
300ul中，100ul加抗體做為實驗組；100ul不加抗體做為對照組；100ul加入4ul5mnacl（nacl終濃度為0.2m），65℃處理3h解交聯，跑電泳，檢測超聲破碎的效果。
9、在100ul的超聲破碎產物中，加入900ul chip dilution buffer和20ul的50×pic。
再各加入60ul proteina agarose/salmon sperm dna。4℃顛轉混勻1h。
10、1h後，在4℃靜置10min沉澱，700rpm離心1min。
11、取上清。各留取20ul做為input。一管中加入1ul抗體，另一管中則不加抗體。4℃顛轉過夜。
（三）、檢驗超聲破碎的效果。
取100ul超聲破碎後產物，加入4ul 5m nacl，65℃處理2h解交聯。分出一半用酚/氯仿抽提。電泳檢測超聲效果。
第二天：
（一）、免疫複合物的沉澱及清洗。
12、孵育過夜後，每管中加入60ul proteina agarose/salmon sperm dna。4℃顛轉2h。
13、4℃靜置10min後，700rpm離心1min。除去上清。
14、依次用下列溶液清洗沉澱複合物。清洗的步驟：加入溶液，在4℃顛轉10min，4℃靜置10min沉澱，700rpm離心1min，除去上清。
洗滌溶液：a.low salt wash buffer-one wash
b.highsalt wash buffer-one wash
c.licl wash buffer-one wash
d.te buffer-two wash
15、清洗完畢後，開始洗脫。洗脫液的配方：100ul10%sds，100ul 1mnahco3，800ul ddh2o，共1ml。
每管加入250ul洗脫buffer，室溫下顛轉15min，靜置離心後，收集上清。重複洗滌一次。最終的洗脫液為每管500ul。
16、解交聯：每管中加入20ul 5m nacl（nacl終濃度為0.2m）。
混勻，65℃解交聯過夜。
第三天：
（一）、dna樣品的**
17、解交聯結束後，每管加入1ul rnasea（mbi），37℃孵育1h。
18、每管加入10ul 0.5medta，20ul 1mtris.hcl（ph6.5），2ul 10mg/ml蛋白酶k。
45℃處理2h。
19、dn**段的**----omega膠**試劑盒。最終的樣品溶於100ul ddh2o。
（二）、pcr分析
如何檢測染色質免疫共沉澱的效率
如何檢測染色bai質免疫共 du沉澱的效率 利用識別特zhi定蛋白dao的抗體,捕獲與此蛋白相互作用的核酸專.特定屬蛋白多半是能夠與核酸結合的,轉錄因子,調控原件等等,而抗體可以是識別不同修飾的蛋白,例如乙醯化什麼的,用於轉錄調控,表觀遺傳學研究等等 抗體掛到固相支援物上 磁珠或瓊脂糖 製備親和純化...
染色質免疫共沉澱試劑盒多少錢,什麼是染色質免疫共沉澱技術ChIP？
搜下喬羽生物，應該是知道的.實驗室的老師之前是在遠慕生物買過的,方便還可以接受的 什麼是染色質免疫共沉澱技術 chip 染色質免疫共沉澱技術是在保持組蛋白和dna聯合的同時，通過運用對應於一個特定組蛋白標記的生物抗體，染色質被切成很小的片斷，並沉澱下來的技術。這項技術主要用來分析目標基因有沒有活性 ...
關於免疫共沉澱最後一步的問題,免疫共沉澱定量問題求助
最後一步煮沸以後，抗體和抗體結合的蛋白都變性了，從瓊脂糖珠上脫落下來，所以有人直接就連珠子帶上清就去電泳，瓊脂糖進不了膠。或者為了樣品跑出來好看，你直接轉速再高點，甩一下，讓大部分柱子都沉底，取上清電泳就行。一般都用上樣緩衝液煮沸了，珠子上不剩什麼了。免疫共沉澱定量問題求助 真核生物的基因組dna以...