1樓:敏敏
純化蛋白質的檢測可以通過以下方法:
1. uv吸收光譜:利用280nm處的蛋白簡襲質本徵吸收峰,可以檢測到罩咐胡溶液中是否存在蛋白質。
2. bradford法:利用coomassie brilliant blue g-250(cbbg-250)的著色反應,可以選擇性地對蛋白質進行染色。
蛋白質與cbbg-250發生相互作用,形成一種吸收波長位於595nm的藍色複合物,根據吸光度值可以得知溶液中蛋白質的濃度。
3. bca法:用px奈米分光光度計對500-700nm光譜區域物攔的吸光度進行測量,然後按照一定的比例新增bca試劑,並在60℃加熱,利用還原劑和含銅離子的鹼性溶液將蛋白質-bca-銅絡合物顯色,隨著蛋白質濃度的增大,絡合產物的顏色加深,從而反映蛋白質的含量。
4. 毛細管電泳:根據蛋白質電荷量不同,在電場中通過毛細管進行分離,通過檢測蛋白質的遷移率可以分析樣品中蛋白質的型別和含量。
2樓:網友
有以下幾種方法可以檢測純化的蛋白質是否存在:
1. bradford染色法:該方法是通過將蛋白質與bradford染料作用來測定蛋白質濃度。在此基者宴礎上,可以判斷樣品中是否含有蛋白質。
2. bca法:通過還原劑將蛋白質中的銅離子還原成cu+,然後cu+和bca(雙香豆酸)反應,形成紫色絡合物。根據生成的紫色程度可以知道樣品是否含有蛋白質。
3. 紅外光譜法:該方法適用於所有的機械化或化學處理後的蛋白質。枝嫌豎利用atr(全反射衰減)技術,可猛大以測定蛋白質中不同的化學鍵資訊,從而判斷樣品是否含有蛋白質。
4. sds-page:可以用聚丙烯醯胺凝膠電泳分離出蛋白質,然後對凝膠進行染色或western blotting等手段,從而確定樣品是否含有蛋白質。
5. 生物學活性檢測:例如,在細胞培養條件下,新增即可提取蛋白質的細胞基質或培養上清樣品,觀察是否會導致細胞增殖或其他生物學效應,可以判斷樣品中是否含有活性蛋白質。
用什麼進行蛋白質純度的鑑定
3樓:網友
sds 聚丙乙烯醯胺凝膠電泳。
考馬斯亮蘭法雙縮脲法(biuret法)和folin—酚試劑法念告(lowry法)的明顯缺點和許多限制,促使科學家們去尋找更好的蛋白質溶液測定的方法。 1976年由bradford建立的考馬斯亮蘭法(bradford法),是根據蛋白質與染料相結合的原理設計的。這種蛋白質測定法具有超過其他幾種方法的突出優點,因而正在得到廣泛的應用。
這一方法是目前靈敏度最高的蛋白質測定法。 考馬斯亮蘭g-250染料,在酸性溶液中與蛋白質結合,使染料的最大吸收峰的位置(lmax),由465nm變為595nm,溶液的顏色也由棕黑色變為蘭色。經研究認為,染料主要是與蛋白質中的鹼性氨基酸(特別是精氨酸)和芳香族氨基酸殘基相結合。
在595nm下測定的吸光度值a595,與蛋白質濃度成正比。 bradford法的突出優點是: (1)靈敏度高,據估計比lowry法約高四倍,其最低蛋白質檢測量可達1mg。
這是因為蛋白質與染液謹料結合後產生的顏色變化很大,蛋白質-染料複合物有更高的消光係數,因而光吸收值隨蛋白質濃度的變化比lowry法要大的多。 (2)測定快速、簡便,只需加一種試劑。完成乙個樣品的測定,只需要5分鐘左右。
由於染料與蛋白質結合的過程,大約只要2分鐘即可完成,其顏色可以在1小時內保持穩定,且在5分鐘至20分鐘之間,顏色的穩定性最好。因而完全不用像lowry法那樣費時和嚴格地控制時間。 (3)干擾物質少。
如干擾lowry法的k 、na 、mg2 離子、tris緩衝液、糖和蔗糖、甘油、巰基乙醇、edta等均不干擾此測定法。 此法的缺點是: (1)由於各種蛋白質中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此bradford法用於不同蛋白質測定時有較大的偏差,在製作 標準曲線時通常選用 g—球蛋白為標準蛋白質,以減少這方面的偏差。
2)仍有一些物質干擾此法的測定,主要的干擾物質有:去汙劑、 triton x-100、十二烷基硫酸鈉(sds)和的naoh。(如同的酸干擾lowary法一樣)。
3)標準曲線也有輕微的非線性,因而不能用beer定律進行計算,而只能用標準曲線來測定未知仔埋明蛋白質的濃度。
用什麼方法檢測蛋白質,檢測蛋白質的實驗原理是什麼
燃燒 有燒焦羽毛味道。檢測蛋白質的實驗原理是什麼 檢測蛋白質的實驗原理是雙縮脲試劑。與蛋白質呈現紫色反應,由於蛋白質分子中含有許多與雙縮脲結構相似的肽鍵。在鹼性溶液中,雙縮脲試劑能與蛋白質反應,形成紫色絡合物。蛋白質 protein 是生命的物質基礎,是有機裂簡大分子,是構成細胞的基本有機肆知褲物,...
蛋白質的分離純化技術有哪些
1.根據分子大小不同進行分離純化 蛋白質是一種大分子物質,並且不同蛋白質的分子大小不同,因此可以利用一些較簡單的方法使蛋白質和小分子物質分開,並使蛋白質混合物也得到分離。根據蛋白質分子大小不同進行分離的方法主要有透析 超濾 離心和凝膠過濾等。透析和超濾是分離蛋白質時常用的方法。透析是將待分離的混合物...
尿檢蛋白質,尿檢蛋白質
1 的蛋白,最近清淡飲食,少吃肉類,豆類。多休息。不要熬夜。一週後複查,還是1 的話,就需要 排除腎炎早期了 多喝水,吃點清熱的食物,上火,喝水少,小便容易黃 假如確診腎炎的話,不太建議在上海工作的,壓力太大。飲食水質也不太好。正常尿液裡不含或只含微量蛋白質,檢查結果呈陰性 當尿液裡的蛋白質含量上升...