1樓:網友
利用蛋白質的天然螢光檢測蛋白質的構象變化
利用蛋白質中的芳香族氨基酸殘基的側鏈基團具有吸收紫外區域的入射光從而發射螢光的特性,來研究蛋白質在變性或復性過程中整體空間構象的變化。
其基本機理是:
螢光**於生色團基團在不同電子能級之間的躍遷,螢光頻率取決於能級之間的能量差,生色團基團與周圍基團的相互作用可能會改變其處於激發態。
時所具有的能量,從而改變其發射螢光的頻率與強度。同一種螢光分子在不同極性的環境中,其最大吸收波長可能會有所差別。一般來說,極性環境會影響生色團基團的基態。
和激發態能級,減少激發態的能量,從而引起發射譜的紅移。
使λmax增大)。在天然的蛋白質中,可產生螢光的芳香族氨基酸分子多處於蛋白質的內部,被多種非極性氨基酸殘寬宴基包圍,因此其所處的區域性小環境的極性弱於蛋白質分子外部水溶液的極性。蛋白質變性。
過程中,芳香族氨基酸分子的側鏈基團逐漸暴露於水溶液中,其所處的環境極性逐漸增加,因此蛋白質螢光發射峰的λmax逐漸增大。λmax紅移的程度可以反映蛋白質構象變化的程度,紅移程度越大則表明蛋白質在變性過程中構象變化的程度越大。反過來,蛋白質復性過程中,芳香族氨基酸分子的側鏈逐漸內埋於蛋白質內部,其爛裂所處的環境極性逐漸降低,因此蛋白質螢光發射峰的λmax逐漸減小,稱為λmax的藍移。
通過測定蛋白質λmax藍移的程度,可以推算其整體構象變化的程度。
2、 利用螢光探針。
檢測蛋白質的構象變化。
由於螢光探針的螢光光譜對環境變化十分敏感,使得它對蛋白質分子的構象變化也就十分敏感。例如用ans做螢光探針的時,它通過非共價結合到蛋白質分子的非極性區域中時,其螢光光譜會隨著所處環境非極性的增加而發生藍移,且螢光強度也隨之提高,最大吸收/發射飢巧閉在375/500nm,在一定範圍內,螢光強度與蛋白質的濃度呈線性關係。利用ans的這個性質,可以衡量ans結合的蛋白質部位的極性的變化,根據極性的變化又可以進一步推測蛋白質結構。
的變化。
2樓:邊走邊忘
一般都可以,尤其是大分子的,主要是悶鉛並酪氨酸、螞跡色氨酸激拆、苯丙氨酸可以發螢光,所以含這三種氨基酸的蛋白質都能發螢光。
紫外交聯能證明蛋白質相互作用麼
3樓:匿名使用者
在許多的細胞生命活動中,例如dna複製、mrna轉錄與修飾以及病毒的感染等都涉及到dna與蛋白質之間的相互作用的問題。
重組dna技術的發展,人們已分離到了許多重要的基因。現在的關鍵問題是需要揭示環境因子及發育訊號究竟是如何控制基因的轉錄活性。為此需要:
a、鑑定分析參與基因表達調控的dna元件;
b、分離並鑑定這些順式元件特異性結合的蛋白質因子;
這些問題的研究都涉及到dna與蛋白質之間的相互作用。
研究dna-蛋白質相互作用的實驗方法主要包括:
a、凝膠阻滯實驗; b、dnase 1 足跡實驗;
c、甲基化干擾實驗; d、體內足跡實驗; f、拉下實驗。
螢光光譜法可以研究蛋白質與蛋白質的相互作用嗎
4樓:
塔里木盆地是大型封閉性山間盆地,地質構造上是周圍被許多深大斷裂所限制的穩定地塊,地塊基底為古老結晶岩,基底上有厚約千公尺的古生代和元古代沉積覆蓋層,上有較薄的中生代和新生代沉積層,第四紀沉積物的面積很大,構造上的塔里木盆地地塊和地貌上的塔里木平原,範圍並不一致。
為什麼蛋白質具有紫外吸收的特性
5樓:小林聊教育
蛋白質具有紫外吸收的特性是因為有芳香氨基酸殘基,芳香氨基酸的r基含有苯環共軛π鍵系統。其中色氨酸,酪氨酸以及苯丙氨都屬於芳香氨基酸,它們具有紫外吸收特性,蛋白質吸收紫外光能力的大小,主要取決於芳香族氨基酸的含量。
酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸在紫外光區具有明顯的光吸收現象。而大多數蛋白質中都含有這3種氨基酸,尤其是酪氨酸。因此,可以利用280nm波長處的紫外吸收特性定量檢測蛋白質的含量。
6樓:ok嬤嬤嬤哦
蛋白質理化性質:
兩性解離-酸鹼性質。
高分子性質。
膠體性質。紫外吸收性質。
呈色反應。蛋白質(protein)是生命的物質基礎,是有機大分子,是構成細胞的基本有機物,是生命活動的主要承擔者。沒有蛋白質就沒有生命。氨基酸是蛋白質的基本組成單位。
它是與生命及與各種形式的生命活動緊密聯絡在一起的物質。機體中的每乙個細胞和所有重要組成部分都有蛋白質參與。蛋白質占人體重量的16%~20%,即乙個60kg重的成年人其體內約有蛋白質。
人體內蛋白質的種類很多,性質、功能各異,但都是由20多種氨基酸(amino acid)按不同比例組合而成的,並在體內不斷進行代謝與更新。
7樓:辜愫虞偉曄
因為蛋白質分子中色氨酸與酪氨酸殘基能吸收紫外光(λ=280nm)
8樓:網友
蛋白質由氨基酸組成,其中色氨酸,酪氨酸以及苯丙氨酸具有紫外吸收特性,而蛋白質幾乎都含有這幾種氨基酸。
紫外光吸收法測定蛋白質濃度時,為什麼要同時測定280nm及260nm的吸光度
9樓:匿名使用者
紫外吸收檢測dna濃度與純度2007年11月13日 星期二 11:40目的: 瞭解紫外吸收檢測dna濃度與純度的原理,掌握測定方法。
原理: 核酸的最大吸收波長為260nm,蛋白質為280nm,在波長260nm時,1od值相當於雙鏈dna濃度為50μg/ml,單鏈 寡核苷酸的含量為30μg/ml,可以據此來計算核酸樣品的濃度,還可通過測定在260nm和280nm的od值的比值 (od260/od280),估計核酸的純度。純淨dna的比值為, rna為若比值高於說明dna樣品中的rna尚未除 盡,若樣品中含有酚和蛋白質將導致比值降低。
270nm存在高吸收表明有酚的干擾。 紫外分光光度法只能用於測定濃度 大於的核酸溶液,對濃度更小的樣品,可採用螢光分光光度法。 試劑與儀器:
提取的質粒dna,紫外分光光度儀。 操作步驟: 1) 分光光度計先用水在260nm和280nm兩個波長下校零。
2) 取質粒dna樣品2μl,用水稀釋100倍,轉入分光光度計的石英比色杯中。 3) 在260nm和280nm分別讀出樣品光密度值。如果樣品濃度單位為μg/μl,則樣品dna濃度為od 值的10倍,即如 od260=,則樣品濃度即為1μg/μl.
4) 若od260/od280大於,說明仍有rna,可以考慮用rna酶處理樣品,若小於,說 明樣品中含有蛋白質或酚,應再用酚/氯仿抽提,以乙醇沉澱純化dna.
1mg/ml蛋白質紫外吸收光譜曲線圖,200nm到400nm
10樓:瑞麗詩小白
你好紫外—見光光度析。
基本要求。掌握:本章要求掌握光光度特點、基本原理、測定及計算;吸收光譜與電躍遷型別物質光選擇吸收與吸收光譜曲線摩爾吸收係數與吸收係數吸光度與透光度偏離朗伯-比爾定律原;掌握顯色反應條件及光度測量條件選擇;掌握紫外—見光光度計主要部件各部件作用及儀器原理主要型別及特點;掌握差示光光度原理、特點。
理解:物質結構與紫外吸收光譜關係吸收波位移與結構變化關係;紫外—見光光度定量析影響結準確度各種素。
解:解紫外—見光光度測定靈敏度選擇性途徑;雙波光光度等其光光度定量測定;紫外—見光光度機化合物結構解析面作用及其面應用。
二、 基本概念與重點內容。
a概述1.紫外—見光光度特點。
靈敏度與準確度較高;選擇性較;裝置簡單、操作簡便。
2.光光度發展程。
目視比色 光電比色 光光度。
3. 紫外—見吸收光譜。
紫外—見吸收光譜基於物質吸收紫外輻射或見光其外層電躍遷稱電躍遷光譜紫外—見光光度基於物質紫外—見吸收光譜建立種定性、定量析。
4. 光基本性質。
5.物質光吸收及吸收光譜。
6.紫外—見吸收光譜與電躍遷型別。
7.色團與助色團。
b 光吸收定律。
1.光吸收基本定律(朗伯-比爾定律)
2.吸光度與透光率、百透光率間關係。
3.工作曲線繪製與應用。
4.吸光係數、摩爾吸光係數桑德爾靈敏度。
5. 偏離朗伯-比爾定律素。
c紫外-見光光度計。
1. 光光度計主要部件。
2. 紫外見光區進行測量別選擇何種光源。
3. 單色器主要元件。
光柵;稜鏡。
4. 光光度計檢測器型別。
早期:光電池;光電管;光電倍增管。
5.紫外-見光光度計型別及特點。
d顯色測定試製備光度測定條件選擇。
1.顯色反應及其影響素。
2.測定讀數誤差測定條件選擇。
5.入射波選擇。
e 光光度定量測定與其應用。
1.單組測定。
通採用 a-c 標準曲線定量測定。
2.組同測定。
3.紫外見吸收光譜機化合物結構解析作用。
解共軛程度、空間效應、氫鍵等;飽與飽化合物、異構體及構象進行判別機化合物結構解析紫外見吸收光譜沒紅外吸收光譜提供結構資訊。
4.紫外—見吸收光譜機物髮色體系資訊析般規律。
紫外分光光度法測量蛋白質的含量的原理?
11樓:嘿丶小公尺
1紫外吸收光譜是基於物質的生色團和助色團的特性對紫外光譜的吸收,可用於物質的鑑定和結構分析。
2參與蛋白質組成的20種氨基酸中色氨酸(trp)、酪氨酸(tyr)和苯丙氨酸(phe)的r基團中含有苯環共軛雙鍵系統,在紫外光區(220-300nm)顯示特徵的吸收譜帶,最大光吸收(max)分別為、和259nm。由於大多數蛋白質都含有這些氨基酸殘基,因此用紫外分光光度法可測定蛋白質含量。
因此可以用標準曲線法在280nm測樣品吸光度,求得蛋白含量。
紫外可見吸收光譜的物理意義
12樓:藺璧拜詩蕾
在數值上等於1mol/l的吸光物質在1cm光程中的吸光度,ε=a/cl,與入射光波長、溶液的性質及溫度有關。
1)吸光物質在特定波長和溶劑中的乙個特徵常數,定性的主要依據。
2)值愈大,方法的靈敏度愈高。
強吸收。較強吸收。
10²~10³中吸收。
10²弱吸收。
13樓:秒懂百科
紫外可見吸收光譜:由於價電子的躍遷而產生的分子光譜。
紫外光譜能不能檢測蛋白質
14樓:網友
可以,一般測定280nm吸光度,可以粗略估算蛋白含量。
15樓:匿名使用者
應該是用紫外分光光度計 蛋白質在280nm處有特殊的吸收峰 因為蛋白質中的氨基酸有共軛的雙鍵 所以會吸收280nm的紫外光。
哪些物質能在紫外可見光區產生吸收
當在飽和碳氫化合物中引入含有p鍵的不飽和基團時,會使這些化合物的最大吸收波長位移至紫外及可見光區,這種不飽和基團成為生色團 例如,ch2ch2的最大吸收波長位於171nm處,而乙烷則位於遠紫外區 首先有機化合物吸收光譜中,如果分子中存在兩個以上的雙鍵共軛體系,則會有強的k吸收帶存在,吸收峰位置位於近...
請問可見光的波長範圍不可見光的波長範圍
在整個電磁波範圍 中,可見光只佔極其狹窄的一個小範圍 廣義的電磁波 範圍 波長 cm 頻率 hz 無線電波 30 10 9 微波30 0.1 1 10 9 3 10 11 遠紅外 0.1 5 10 3 3 10 11 6 10 12 中紅外 6 10 3 2.5 10 4 6 10 12 1.2 1...
有機分子具有哪些特徵才可以對紫外可見光區的光量子產生吸收作用
有機化合物在紫外 可見光區的吸收特性,取決於分子可能發生的電子躍遷型別,以及分子結構對這種躍遷的影響。哪些物質能在紫外 可見光區產生吸收?當在飽和碳氫化合物中引入含有p鍵的不飽和基團時,會使這些化合物的最大吸收波長位移至紫外及可見光區,這種不飽和基團成為生色團 例如,ch2ch2的最大吸收波長位於1...