1樓：北京索萊寶科技****
實驗操作注意事項：儘管擴增序列的殘留汙染大部分是假陽性反應的原因，樣品間的交叉汙染也是原因之一。因此，不僅要在進行擴增反應是謹慎認真，在樣品的收集、抽提和擴增的所有環節都應該注意：
1)戴一次性手套，若不小心濺上反應液，立即更換手套。
2)使用一次性吸頭，嚴禁與pcr產物分析室的吸頭混用，吸頭不要長時間暴露於空氣中，避免氣溶膠。
的汙染。3)避免反謹老應液飛濺，開啟反應管時為避免此種情況，開蓋前稍離心收集液體擾賀於管底。若不小心濺到手套或桌面上，應立刻更換手套並用稀酸擦拭桌面。
4)操作多份樣品時，製備反應混合液，先將dntp、緩衝液。
引物和酶混合好，然後分裝，這樣即可以減少操作，避免汙染，又緩晌派可以增加反應的精確度。
5)最後加入反應模板，加入後蓋緊反應管。
6)操作時設立陰陽性對照和空白對照，即可驗證pcr反應的可靠性，又可以協助判斷擴增系統的可信性。
7)儘可能用可替換或可高壓處理的加樣器，由於加樣器最容易受產物氣溶膠或標本dna的汙染，最好使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器，至少pcr操作過程中加樣器應該專用，不能交叉使用，尤其是pcr產物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區。
8)重複實驗，驗證結果，慎下結論。
2樓：匿名使用者
pcr操作注意事項：1.從少量樣品（1-10mg組織或102-104細伍笑虧胞）中提取rna時可加入少許糖原以促腔神進rna沉澱。
例如加800ml trizol勻漿樣品，沉澱rna前加5-10μg rnase-free糖原。糖原會與rna一同沉澱出來，糖原濃度不高於4mg/ml是不影響第一鏈的合成，也不影響pcr反應。2．勻漿後加氯仿之前樣品可以在-60至-70℃儲存至少乙個月。
rna沉澱可公升局以儲存於75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。3．分層和rna沉澱時也可使用臺式離心機，2600×g離心30-60分鐘。預期產量：
1mg組織或1×106細胞提取rna分別為：肝和脾6-10μg ,腎3-4μg,骨骼肌和腦組織，胎盤1-4μg,上皮細胞8-15μg,成纖維細胞5-7μg
pcr反應的三個步驟是什麼？
3樓：戶如樂
變性（90℃-96℃）：雙鏈dna模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈dna
2.退火（復性）（40℃-65℃）：系統溫度降低，引物與dna模板結合，形成區域性伏輪兆雙鏈。
3.延伸（68℃-75℃）：在taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dntp為原料，從引物的5′端→3′ 端延伸，合成與模板互補的dna鏈。
每一迴圈經過變性、退火和延伸，dna含量既增加一倍。
現在有些pcr因為擴增區很短，即缺租使taq酶活性不是桐御最佳也能在很短的時間內複製完成，因此可以改為兩步法，即退火和延伸同時在60℃-65℃間進行，以減少一次公升降溫過程，提高了反應速度。
pcr實驗操作注意事項有哪些
4樓：信必鑫服務平臺
1、必須在無菌無塵環境下進行操作；
2、檢測人員必須通過國家臨檢中心業務培訓並取得合格證書；
3、必須擁有標準的的pcr螢光實驗室；
4、後pcr區pcr完成以後，應該留出乙個專門用於反應後處理樣品的地方。
rt-pcr的注意事項是什麼?
5樓：天然槑
實驗中的一些好習慣。
加入試劑之前，把它混勻一下，以免放置時間長了濃度不均。
移液槍用完之後要歸到最大計量的位置，防止久而久之彈簧失去彈性。
一定要記著關水浴箱，切記切記。
多和大家討論，同時多關注別人討論的經驗，這幾乎是最快提高的捷徑了。
所有的試劑都自己配，出了問題才好找原因。
防止rna酶汙染的措施。
1.所有的玻璃器皿均應在使用前於180℃的高溫下幹烤6hr或更長時間。
2.塑料器皿可用 depc水浸泡或用氯仿沖洗（注意：有機玻璃器具因可被氯仿腐蝕，故不能使用）.
3.有機玻璃的電泳槽等，可先用去汙劑洗滌，雙蒸水沖洗，乙醇乾燥，再浸泡在3% h2o2 室溫10min,然後用 depc水沖洗，晾乾。
4.配製的溶液應儘可能的用 depc,在37℃處理12hr以上。然後用高壓滅菌除去殘留的depc.不能高壓滅菌的試劑，應當用depc處理過的無菌雙蒸水配製，然後經濾膜過濾除菌。
5.操作人員戴一次性口罩、帽子、手套，實驗過程中手套要勤換。
6.設定rna操作專用實驗室，所有器械等應為專用。
二、常用的rna酶抑制劑。
1.焦磷酸二乙酯（depc）：是一種強烈但不徹底的rna酶抑制劑。它通過和rna酶的活性基團組氨酸的咪唑環結合使蛋白質變性，從而抑制酶的活性。
2.異硫氰酸胍：目前被認為是最有效的rna酶抑制念和劑，它在裂解組織的同時也使rna酶失活。它既可破壞細胞結構使核酸從核蛋白中解離出來，又對rna酶有強烈的變性作用。
3.氧釩核糖核苷複合物：由氧化釩離子和核苷形成的複合物，它和rna酶結合形成過渡態類物質，幾乎能完全抑制rna酶的活性。
酶的蛋白抑仔敬盯製劑（rnasin）：從大鼠肝或人胎盤中提取得來的酸性糖蛋白。rnasin是rna酶的一種非競爭性抑制劑，可以和多種rna酶結合，使其失活。
5.其它：sds、尿素、矽藻土等對rna酶也有一定抑制作用。
因為depc不加選擇的修飾蛋白質和rna,因此在分離和純化rna過程中不能使用，而且它與一些稿侍緩衝液(例如tri)不能相容。
在所有rna實驗中，最關鍵的因素是分離得到全長的rna.而實驗失敗的主要原因是核糖核酸酶（rna酶）的汙染。
rna酶可耐受多種處理而不被滅活，如煮沸、高壓滅菌等。
研究人員造成的汙染 rna酶最主要的潛在汙染源是研究人員的手。因此進行rna實驗時應勤換手套。
簡述pcr技術操作步驟
6樓：科技點燈人
原理：dna聚合酶鏈式反應技術簡稱pcr技術，是一種以模板dna為基礎，在引物和4種並中脫氧核糖核苷酸存在的條件下，利用dna聚合酶的酶促反應，完成對模板的目的片段的快速擴增的過程。
步驟為：1)變性：雙鏈dna在94℃條件下，通過熱變性使模板的雙鏈dna氫鍵斷裂變成單鏈。
2)復性：當變性溫度突然降至引物tm值(通常春雹為35～65℃)以下時，會使引物與模板dna互補序列雜交。由於引物一般由10～25個鹼基序列，模板dna結構遠比引物分子複雜，且反應體系中引物分子的濃度又遠大於模板dna，故在退火溫度時，引物與模板dna容易結合形成互補鏈。
3)延伸：在dna聚合酶的作用下，以dna為模板和以4種脫氧核糖核苷酸為原料，在mg2+存在的條件下。dna聚合酶依賴於其5'→3'的聚合酶活力，以引物結合於dna模板鏈為起始點。
使引物的序列得以延伸，合絕森山成模板dna的互補鏈。
萃取的注意事項，萃取操作程式和注意事項
1.使用前先來 檢查是否漏液 2.振盪時,雙手自托住分液漏斗,右手按住瓶塞,平放,上下振盪3.放液前,要先開啟瓶塞 4.放液時,記住下層的為密度大的液體,從下面放出.上層的為密度相對小的液體,從上面倒出.5.用完後應馬上清洗乾淨 萃取操作程式和注意事項 操作程式 向待分離溶液中加入與之不相互溶解的萃...
在做pcr的操作過程中需注意哪些問題？
首先，在設計pcr引物時，結構要好，長度應在20bp左右，避免引物間形成引物二聚體。兩條引物的退火溫度儘量保持一致，最好是在55度左右。其次，使用的dna模板量是比較關鍵的，應使用純度較高，基因組較完全，沒有產生斷鏈的基因組dna。然後是pcr體系中各個試劑的使用，比如說酶的純度，活性，並且要注意酶...
孩子取名注意事項，起名的注意事項
首先準備150克泡了2個小時的小米，打入一個雞蛋 取名字大忌用比較極端的字眼 取普通點可能會好點 解答 市面上 的起名書籍基本都是生肖起名，生肖只是八字中的一個字為年支，還有其他七個字都沒有考慮，所以不夠全面。按生肖起名全年寶寶喜用忌諱都是一樣的，實際上八字是相差很遠，不符合個人實際情況，起名是給據...