1樓:紅旗飄揚
動物細胞傳代培養的操作步驟。
1.觀察培養基是否正常,細胞狀態如何,細胞密度如何,決定是否傳代。觀察時擰緊蓋子。
2.加熱pbs、versene、培養基,(提前做好) 瓶子不要倒著放,不要讓液體接觸到瓶塞。
3.開啟超淨臺(先開風機,後開照明),用75%乙醇清潔檯面,點燃酒精燈。不要把廢液缸拿出去倒,如果廢液太多,可以用其他容器先裝廢液。取小離心管乙個,置於架子上。
4.取尖吸管、吸量管各一支,放置在專用的架上。放置的方式,注意吸管、吸量管前端都不要與架子接觸。
5.取待傳代的細胞。開啟versene,用酒精燈外焰燒。燒吸管時距離酒精燈心遠些,不要把渣滓帶進去。把試劑拿入臺子的時候,儘量平穩,不要讓試劑碰到瓶口。
6.用吸量管吸取舊的培養基,置離心管中,吸量管加入versene,然後將versene瓶晌李收起來。(加versene主要是為了將舊培養基洗去)。
在離心管中間部分將液體加入。吸液體和加液體時都不要對著細胞。
7.開啟胰酶,然後將versene棄掉。換新管,用尖吸管吸取適量胰酶加入。加胰酶後,儘快放平,使細胞消化時間一致。
8.將細胞放入37度孵箱。放孵箱2min, 收胰酶,開啟pbs. 之後拿出來鏡下隨時觀察。使用二次消化法,去除容器中殘餘的細胞。別忘了用舊培養基中和。
9.取細胞,鏡下觀察消化情況。消化程度合適之後(細胞變圓,但宴虧遲不漂起),用尖吸管棄去胰酶,取離心管中的培養基加入細胞,吹打,至所有細胞從培養皿底部脫落下來。
用pbs洗細胞,versene對細胞有毒性,且不能被血清中和。然後吸取至離心管中,800 rpm離心5分鐘。
10.吸量管吸取適量培養基加入新的培養皿中。
11.細胞離心畢,用吸新培養基的管棄去上清,先把泡沫吸走。換吸量管吸取培養皿中培養基適量,加入離心管,小體積混勻,將細胞重懸,尖吸管吹勻。
12.擦計數板,用槍吸空巖10ul的液體,計數。不要把槍伸到離心管內。
13.吸量管吸取細胞懸液,加入新的培養皿中。鏡下觀察,搖勻,放入37度孵育。收超淨臺。
細胞傳代的具體過程是什麼?
2樓:網友
1.紫外線提前20-30min開啟;
2.關紫外燈,開燈,通氣,點燃酒精燈;
3.檢查細胞生長狀況;顯微鏡下觀察各濃度下細胞生長狀況(數量、形態、透。 亮度、貼壁配塵情況);用酒精棉對培養瓶外部進行擦拭。
4.將培養基倒喊陪掉,加pbs沖洗一下,如不需傳代,加入5ml新鮮培養基即可;
5.傳代:加 pbs沖洗一下(快速);
6.加入3滴左右 pbs,37℃培滲禪1分鐘,輕敲瓶壁使大部分細胞脫落,加入3n(n為傳代瓶數)ml培養基(dmem);
7.用吸管輕柔吹打,儘量讓細胞均勻分散開來,各取出3ml至新瓶中;
8 .放入co2培養箱(培養條件5% co2、飽和溼度、37℃ )這個是我做實驗的時候用的protocol
看是否對你有所幫助~歡迎追問~
傳代細胞系的細胞特點
3樓:陌語哲倪
二倍體細胞在傳代繁殖過程中,有些細胞發生改變,不僅形態發生變化,且生長更快,能以少量的細胞起始培養。由乙個這樣的細胞得到的細胞轉殖,與它起源的細胞株大不相同,它能無限期地生存,這樣的細胞轉殖稱為傳代。
在動物細胞培養中,有部分細胞可無限制傳代下去,這種傳代細胞稱為
4樓:鄭向善
d細胞系。細胞系(cell line)指原代細胞培養物經首次傳代成功後所繁殖的細胞群體。 也指可長期連續傳代的培養細胞。動物細胞可以傳代培養。
植物細胞也可以傳代培養(如懸浮細胞培養),但是通常不對植物細胞進行傳代培養。
植物細胞一般是愈傷組織培養。即對一團未分化的細胞進行原代,繼代培養。
傳代培養,也可稱為繼代培養,就是當細胞(通常動物)或愈傷組織(植物)長的足夠多時,將其從乙個瓶子到多個瓶子擴大培養。
5樓:墨小雕
d 細胞系。
在細胞繁殖過程中 一般只可以繁殖大10~50次 這些細胞稱作細胞株 在五十代之後細胞就會大量死亡 剩下可以無限繁殖的細胞 屬於癌變細胞 叫細胞系。
6樓:網友
d細胞系:細胞系的特徵是無限傳代,只有能無限傳代的細胞才能稱為細胞系。
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