核酸提取儀的主要步驟及方法,DNA抽提方法與步驟

2022-02-28 07:08:22 字數 6007 閱讀 3422

1樓:匿名使用者

1. 環境溫度:5℃~40℃;環境相對溼度;電壓:50%~80%範圍:100~240vac,50/60 hz。

2. 將儀器放在水平實驗臺上。

3. 放置儀器時應保證儀器周圍10cm內無障礙物;多臺儀器同時使用時,每臺儀器之間的距離應不小於50cm。

4. 儀器主機通電之前,必須先用六角扳手取下磁棒架固定螺絲,否則通電執行將會損壞儀器。

5. 96孔板和磁力棒套的安裝必須與對應的卡槽完全契合。

6. 請勿將該儀器安放在過度潮溼、高溫或陽光直射等溫度變化劇烈的區域,這可能會影響儀器的效能。

7. 請勿和其它大功率器件如離心機、空調等共用同一電源插座以免電源電壓波動影響系統執行。

8. 請將介面卡連線到儀器,把介面卡與電源插座相連,並開啟儀器開關。

9. 請勿在有潛在有害液體或氣體的環境中操作該儀器。

10. 本儀器詳細操作步驟,請參閱以下的說明。

1.5注意事項

1. 儀器應放在溼度低、灰塵少並遠離水源的地方,室內應通風良好,儀器後方勿緊靠牆壁或堆放其他物品,以免影響散熱。

2. 實驗執行過程中禁止直接關閉電源開關。如果需要提前停止實驗,請先在觸屏軟體上點選停止執行並確認後再關閉電源。

3. 裂解孔、洗滌孔和洗脫孔的樣本體積應在50μl-1000μl,避免體積過多,溢位孔位。

4. 機器執行及測試進行時,請勿觸控加熱條,以免燙傷。

5. 紫外燈開啟滅菌時,請勿直視紫外光。

6. 移動儀器之前,請先切斷電源,再用螺釘固定磁棒架。

7. 儀器長期不使用時,請拔掉插頭,並用軟布或塑料袋覆蓋儀器,以防止灰塵進入。

歡迎諮詢

biog全自動核酸提取儀

2樓:封琴瑟煙雨冢

核酸提取儀,是應用配套的核酸提取試劑來自動完成樣本核酸的提取工作的儀器,核酸提取儀分為兩類:一類是大型的自動化的,一般稱為自動液體工作站;另一類是小型自動核酸提取儀,利用封裝好的配套試劑自動完成提取純化過程。大型自動液體工作站因為裝置成本高昂,執行成本高,適合一次提取幾千個同一種類標本,所以真正得到應用的比較少;而小型自動化的儀器,因為儀器裝置和執行成本低,操作方便 得到越來越多的應用。

nucleic acid extraction system是使用通用磁珠法提取核酸的高科技產品,具有自動化程度高,提取速度快,結果穩定,操作簡便的優點。利用一般生化專用的96孔反應盤,可同時操作1-32個樣品,可廣泛應用於常規科研、基因組學、疾控系統、食品安全、法醫等領域。使用本儀器只需加入樣品與以磁珠為載體的全自動核酸提取試劑於96孔專用反應盤中,選擇或編輯適當程式後執行即可。

搭配不同種類的磁珠核酸試劑組,可以快速提取動植物組織、血液、體液、刑事檢體等樣品中的dna和rna

大螢幕全中文操作

大螢幕全中文顯示;觸屏式操作,簡單易用。

精確控制

內建工程用電腦,無需再連線個人電腦;單機操作節省更多的空間與能源,並提供高穩定度的自動化控制系統。

溫度控制

可根據需求自定義裂解、洗脫溫度。

自由程式設計

強大的程式編輯功能;靈活、高效地定義您的應用,可滿足不同試劑要求。

快速提取

操作時間短,30-60分鐘/次;適量大,每次可同時提取1-32份樣品。

高純度、高得率

可根據試劑優化提純方案,配合精確的溫育時間,實現了更高的提取效率,提取的dna/rna純度高,可以直接用於pcr和rt-pcr。

結果穩定

避免人工操作引起的差異及錯誤,結果溫度,重複性好。

自我清潔

具有內建可定時紫外消毒功能。

汙染控制

嚴格控制孔間汙染及批次間汙染,杜絕交叉汙染。

試劑開放

可使用各種磁珠法提取試劑。

安全可靠

開門自動鎖定保障操作安全;封閉提取倉,一次性耗材,最大程度減少操作者與試劑的接觸;智慧化操作,避免有害物質對人體的危害。

3樓:努力的佐佐

利用核蛋白溶於水和高鹽溶液,但不溶於生理鹽溶液的性質進行分離。

流程:破細胞→濃鹽溶液提取→生理鹽溶液沉澱→苯酚變性除蛋白→水相dna用冷乙醇沉澱。

dna抽提方法與步驟

4樓:小乖乖小鬧鬧

1. 請自行準備:無水乙醇、pbs及1.5ml離心管。

2. 取出析出液和洗滌液,按以下操作:

a) 析出液:4.5ml加入25.5ml無水乙醇;9ml加入51ml無水乙醇。

b) 洗滌液:9ml加入21ml無水乙醇;18ml加入42ml無水乙醇。

c) 配製好的析出液如出現沉澱,可在37℃溶解,搖勻後使用。

3. 細胞處理:a) 培養板培養的單層貼壁細胞,棄培養基,pbs清洗一遍,棄pbs;

b) 培養瓶培養的貼壁細胞應先用胰酶消化,處理為細胞懸液,細胞量在105-106為佳, 1,000 rpm 離心 5分鐘,徹底棄去上清,加入100μl pbs振盪至細胞懸浮;

c) 培養的細胞為懸浮細胞,1,000 rpm 離心 5分鐘,徹底棄去上清,加入100μl pbs振盪至細胞懸浮。

4. 加入200μl裂解液,20μl消化液a,振盪混勻,室溫放置5分鐘。

5. 加入20 μl 消化液b,充分振盪混勻,56℃水浴10 分鐘至細胞完全裂解。

6. 加入500μl析出液,輕輕顛倒混勻,如有半透明懸浮物,不影響dna的提取與後續實驗。

7. 將吸附柱放入收集管內,將上述溶液轉入吸附柱內,靜置2 分鐘,12,000 rpm 4℃離心1 分鐘,棄收集管內廢液。

8. 將吸附柱放**集管內,加500μl 洗滌液至吸附柱內,12,000 rpm 4℃離心1 分鐘,棄收集管內廢液。

9. 將吸附柱放**集管內,12,000 rpm 4℃離心2 分鐘,離去殘留的洗滌液。

10. 取出吸附柱,放入新的1.5 ml 離心管內,加入50-200 μl 洗脫液,靜置3分鐘,12,000 rpm 4℃ 離心2分鐘,收集dna溶液。

提取的dna即可用於下一步實驗或-20℃儲存。

此方法應該配上biog的試劑盒,目前我們實驗室一直這樣做的

dna提取過程中的關鍵步驟及注意事項有哪些

5樓:

一、dna提取的完整步驟 :

1. 取新鮮或冷凍樣品的肌肉組織100ul-200ul或95%alc儲存的樣品組織0.05g。 2. 將組織儘量剪碎,分別裝入1.5ml 的離心管中。

3. 每管中加入450ul的裂解緩衝液(10mm tris-hcl ph8.0; 100mm edta, ph8.0)

4. 每管加入10% sds 50-100ul(70-80不定)  (1-2%),再加入2.5-5ul(3ul)蛋白酶k (20mg/ml),使其終濃度達100ug/ml. 混勻,55℃ 3h至過夜(期間將管子顛倒幾次)。

5. 樣品中加入150ul nacl(鹽析作用),室溫8000rpm離心20min,去沉澱,然後在上清液

中加入等體積(500ul)預冷異丙醇(沉澱dna),混勻,20℃處理30min,14000rpm離心10min,去上清液。沉澱加70%alc洗滌離心去alc,室溫揮發alc5-10min,加te 500ul,加10ul rnaase (終濃度4mg/ul),即2.5ul。

37℃ 30min 或65℃ 15min。

6. 加等體積酸液(提取dna中的蛋白質)緩慢來回顛倒離心管10min,13000-15000rpm離心10min。用移液管(大口tip頭)小心取出上層相至另外乾淨的離心管中,不要觸到兩相之間的白色蛋白層(可視情況重複操作 次)。

7. 加入等體積酚:氯仿(催取酚)(1:1),輕搖,緩慢顛倒混勻10min 13000-15000rpm 離心5-10分鐘,取上層清液於乾淨離心管中。

8. 加入等體積氯仿(氯仿:異戊醇(阻止氯仿揮發)=24:1),輕搖,緩慢顛倒混勻

10min,13000-15000rpm離心5-10min。取上清液加入1/10體積2m nacl和等體積-20℃儲存的無水乙醇(或等體積異丙醇)(沉澱dna),沉澱dna 10min,13000rpm離心5min,去上清,加入100-150ul70%alc,離心,小心倒掉alc(當心dna沉澱丟失),用70%alc再洗一次,然後去alc。45℃烘箱烘乾15-30min,用雙蒸水沿管壁沿四周沖洗(te量視dna沉澱量而定,在80-250ul之間),溶解12-24h,-20℃儲存備用。

二、注意事項:

1、 裂解液要預熱,以抑制dnase,加速蛋白變性,促進dna溶解。

2、 酚一定要鹼平衡。苯酚具有高度腐蝕性,飛濺到**、粘膜和眼睛會造成損傷,因此應注意防護。氯仿易燃、易爆、易揮發,具有神經毒作用,操作時應注意防護。

3、 各操作步驟要輕柔,儘量減少dna的人為降解。

4、 取各上清時,不應貪多,以防非核酸類成分干擾。

5、 異丙醇,乙醇.naac,kac等要預冷,以減少dna的降解,促進dna與蛋白等的分相及dna沉澱。

6、 提取dna過程中所用到的試劑和器材要通過高壓烤乾等辦法進行無核酸酶化處理。

7、 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配製。

6樓:許建設扈錦

dna的粗提取

①準備材料

將新鮮菜花和體積分數為95%的酒精溶液放入冰箱冷凍室,至少24

h。②取材

稱取30

g菜花,去梗取花,切碎。

③研磨將碎菜花放入研缽中,倒入10

ml研磨液,充分研磨10

min。

④過濾在漏斗中墊上尼龍紗布,將菜花研磨液濾入燒杯中(有條件的學校可將濾液倒入塑料離心管中進行離心,用1

000r/min的旋轉頻率,離心25

min,取上清液放入燒杯中)。在4

℃冰箱中放置幾分後,再取上清液。

⑤加冷酒精

將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分數為95%的冷酒精溶液中,並用玻璃棒緩緩地輕輕攪拌溶液(玻璃棒不要直插燒杯底部)。沉澱35

min後,可見白色的dna絮狀物出現。用玻璃棒緩緩旋轉,絮狀物會纏在玻璃棒上。

(2)dna的鑑定

①配製二苯胺試劑

取0.1

mlb液,滴入到10

mla液中,混勻。

②鑑定取4

mldna提取液放入試管中,加入4

ml二苯胺試劑,混勻後觀察溶液顏色(不變藍)。用沸水浴(100

℃)加熱10

min。在加熱過程中,隨時注意試管中溶液顏色的變化(逐漸出現淺藍色)。

研磨液的配製方法

tris:10.1

g(相對分子質量為121.14),先加50

ml蒸餾水溶解,用物質的量濃度為2

mol/l

的鹽酸調至ph8.0,再加下述藥品。

nacl:8.76

g(相對分子質量58.44)

edta:37.2

g(相對分子質量372.24)

sds:20

g(相對分子質量288.3)

待上述藥品全部溶解後,再用蒸餾水定容至1

000ml。

若在室溫低於20

℃時配製藥液,sds呈沉澱析出,此時需要加溫,才能將sds溶解。如果提前配製的研磨液出現了沉澱,則應加溫使沉澱溶解後再使用。

研磨液中幾種藥品的作用

sds(十二烷基磺酸鈉):可使蛋白質變性,與dna分離。

edta(乙二胺四乙酸二鈉):為dna酶的抑制劑,可以防止細胞破碎後dna酶降解dna。

物質的量濃度為0.15

mol/l的氯化鈉溶液:能很好地溶解dna。

tris/hcl:提供緩衝體系,dna在這個緩衝體系中呈穩定狀態。(tris為三羥甲基氨基甲烷)

鑑定dna的其他方法

用紫外燈照射法鑑定dna效果很好。具體鑑定方法如下。

1.配製染色劑。用蒸餾水配製萬分之五的溴化乙錠(eb)溶液。

2.將玻璃棒上纏繞的白色絮狀物抹於蠟紙上,再滴1滴eb溶液染色。

3.將蠟紙放在紫外燈(260

nm)下照射(暗室中),可見橙紅色的螢光(dna的紫外吸收高峰在280

nm處)。

o(∩_∩)o~

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