載體構建時,如何區分質粒是真核表達還是原核表達,二者的啟動子

2021-03-22 06:59:18 字數 3491 閱讀 6076

1樓:山大煤老闆

這個做你就有點盲目了,我覺得你應該先確定你要原核表達,還是真和表達,確定後,在選擇質粒。正如你所說載體是可以構建的,所以質粒作為載體,其啟動子也是可以構建的,,現在實驗室往往自己構建所需要的載體進行表達,就是我需要什麼樣的質粒,我就構建什麼樣的質粒。

明白哇。質粒的啟動子不同之處在於原核和真核表達體系的不同,他們是特異針對不同的表達方式去構建的,有好多呢

2樓:匿名使用者

主要看啟動子吧,真核和原核啟動子的元件,很不同的.

原核: t7, sp6等;

真核: 35s等.

真核過表達質粒,原核過表達質粒的區別~急求~~

3樓:學雅思

一、指代不同

1、真核過表達質粒:真核細胞表達載體之一為pegfp-n1載體,具有對方面的優點。pegfp-n1載體上攜帶有egfp蛋白表達基因。

2、原核過表達質粒:能攜帶插入的外源核酸序列進入原核細胞中進行表達的載體。

二、特性不同

1、真核過表達質粒:該質粒具有很強的複製能力,可以滿足隨宿主細胞**時跟隨胞質遺傳給新生的子細胞,這是真核細胞表達載體保證目的基因穩定表達的因素之一。

2、原核過表達質粒:啟動子是dna鏈上一段能與rna聚合酶結合並起始rna合成的序列,它是基因表達不可缺少的重要調控序列。沒有啟動子,基因就不能轉錄。

由於細菌rna聚合酶不能識別真核基因的啟動子,因此原核表達載體所用的啟動子必須是原核啟動子。

三、載體構建不同

1、真核過表達質粒:,由238個氨基酸組成,分子量約為27kd。gfpgfp在包括熱、極端ph和化學變性劑等苛刻條件下都很穩定,用甲醛固定後會持續發出熒光,但在還原環境下熒光會很快熄滅。

2、原核過表達質粒:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),pcr迴圈獲得所需基因片段。

4樓:匿名使用者

質粒只是小型環狀dna分子,你指的真核、原核具體是什麼?

原核表達載體質粒有哪些,都有什麼特點?真核表達載體質粒有哪些,都有什麼特點?謝謝!

5樓:匿名使用者

。。。你這問題問的,都夠寫一套叢書了。。。

有哪些雙啟動子真核表達載體

6樓:匿名使用者

是的,所有的基因表達載體都要有啟動子,並且不同基因的啟動子可能不同。原核基因在真核生物中表達就要換上真核基因的啟動子。因為真核生物的rna聚合酶只能識別真核生物的啟動子。

原核表達載體和真核表達載體的區別

7樓:威海博銳化機

一、表達載體不同:

原核表達載體構建重組表達載體:

1、載體酶切:將表達質粒用限制性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳後,用膠**kit或凍融法**載體大片段。

2、pcr產物雙酶切後**,在t4dna連線酶作用下連線入載體。

真核細胞表達載體之一為pegfp-n1載體,具有對方面的優點。pegfp-n1載體上攜帶有egfp蛋白表達基因。

二、表達實現方式不同:

真核表達載體具有neo基因,可以採用g418來篩選已成功轉染了該載體的靶細胞。這些特殊的結構可以實現目的基因在靶細胞內的穩定表達。

三、獲得目的基因方式不同:

pegfp-n1載體從結構上看,質粒具有很強的複製能力,可以滿足隨宿主細胞**時跟隨胞質遺傳給新生的子細胞,這是真核細胞表達載體保證目的基因穩定表達的因素之一。

原核表達載體獲得目的基因:

1、通過pcr方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),pcr迴圈獲得所需基因片段。

2、通過rt-pcr方法:提取總rna,以mrna為模板,逆轉錄形成cdna第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行pcr迴圈獲得產物。

8樓:匿名使用者

原核載體可以將真核基因表達,但是表達出來的蛋白是沒有活性的,因為缺少翻譯後修飾系統。。。真核的表達載體呢 由於比較大 不適合大量快速擴增,所以要在其載體上構建可以在原核生物 如大腸桿菌中複製的所需的複製原件 。。。。綜上 在應用的時候 要構建 穿梭質粒 可以穿梭於 原核和 真核 呵呵 還有就是 原核表達載體的基本元件和真核的有不同的地方 。。。。。

總覺得不夠正確答案 。。。。。有些人緣的蛋白在原核裡沒有蛋白翻譯後修飾,表達後沒有活性,這時候就得在真核裡表......

9樓:匿名使用者

主要是因為原核和真核表達系統所需的表達元件不同。

比如說啟動子,終止子在兩種表達系統中是不一樣的。

帶有真核表達元件的是真核載體,能在真核生物內表達;

帶有原核表達元件的是原核載體,能在原核生物內表達。

兩者都具有的為穿梭載體。

1)真核表達載體和原核表達載體就是能在真核生物或原核生物中表達的載體,它們一般都帶有能在真核生物或原核生物中表達的必需表達元件;

2)真核表達和原核表達的目的都是為了能夠大量獲得自己所需要的目的基因的表達產物,最好有生物活性,以便下一步的實驗需要.

3)原核表達載體一般只能在原核生物中表達外源基因,但有些穿梭載體可以分別在真核和原核生物中表達它們的表達元件.

急,如何構建原核表達載體?如何構建真核表達載體?(不要具體例子) 20

10樓:匿名使用者

最簡單的就是用現有的載體就行改建,除非你自己做表達載體優化,一般實驗室都是用現成的載體,匯入目的片段那樣做得!真核表達載體就是多一個轉移片段,原理都是一樣的!

請問,原核表達實驗的主要實驗步驟是什麼?其中原核表達載體怎樣構建?

11樓:匿名使用者

先克隆目的基因,比如pcr擴增。或者直接從其他載體酶切純化找到你所要的載體,一般可用topo ta載體來直接連線pcr產物。或者使用相應的酶切對應載體

完成連線

轉染細菌,比如感受態的e coli

擴增,培養細菌

分離提純載體

原核共表達質粒是什麼意思

12樓:匿名使用者

能夠在原核中表達目的基因的質粒

13樓:匿名使用者

就是同時表達兩個蛋白

真核表達載體和真核表達質粒有區別嗎

14樓:月風千殺舞

質粒是運載體的一種,是一種小型的環狀dna分子,o(∩_∩)o,希望對你有幫助,望採納

15樓:匿名使用者

要看質粒上是否有如下位點:啟動子,調控子,終止子,篩選標記,能否在宿主中表達並且不會干擾宿主正常生活。如果有這些特殊位點,則可以稱作是載體,否則只是質粒。

16樓:兜裡全是糖

質粒不是載體的一種咩 少年想表達什麼

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