1樓：愛波菠蘿
菌落 pcr （colony pcr）是指從膠體或液體培養基中挑選菌落後，進行 pcr 擴增。菌落 pcr 的結果一般可以分為以下三種：
1. 陰性結果（negative）：沒有檢測到目標 dna 片段，可能是由於目標 dna 片段含量過族悄低或 pcr 擴增失敗等原因。
2. 正性結果（positive）：成功檢測到目標 dna 片段，證明實驗操作正確並獲得了目標 dna 片段。
3. 無結果（no result）：這種結果有很多可能性，比如 pcr 擴增反應出現問題、 pcr 擴增前的菌落未正確儲存、目標 dna 片段的序列變異等。
需要注意的是，菌落 pcr 結果的正負取決於目標 dna 片段是否被擴增出來，而不代表對於測試物件是否存在某種菌落或菌種等其他資訊的判斷和推斷。因此，在帶友實際操作中，科學家們需要在菌落 pcr 結果的基礎上，結合其他實驗技術和資訊推斷等更全面蠢穗槐的資料來做出綜合性的結論。
2樓：網友
菌落pcr是一種檢測細菌的方法，通過pcr技術擴增細菌的dna，然後進行分析。根據pcr擴增的結果，可以分為三種情況：
1. 陰性結果：如果pcr擴增的結果中沒有檢測到目標細菌的dna，慧悉那麼就是陰性結果。這種情況下，可以排除目標細菌的存在。
2. 弱陽性結果：如果pcr擴增的結果中檢測到目標細菌的dna，但是擴增的訊號很弱，不能確定是否真的存在目標細菌，那麼就是弱陽性結果。
這種轎碧絕情況下，需要進一步檢測或者重複檢測，以確定是否存在目標細菌。
3. 強陽性結果：如果pcr擴增的結果中檢測到目標細菌的dna，且擴增的訊號很強，可以確定存在目標細菌，那麼就是強陽性結果。
這種情況下，需要進一步分析目標細菌的種類和數量，以閉姿確定是否需要採取措施進行處理。
總之，菌落pcr的結果可以幫助我們確定細菌的存在與否，以及細菌的數量和種類，對於疾病的診斷和**都有很大的幫助。
3樓：網友
1. 菌落pcr的三種結果分別是陽性、陰性和無效。
2. 陽性表示樣本中存在目標細菌，陰性表示樣本中不存在目標細菌，無效表示實驗操作或穗鬧鬥者樣本質量出現問題導致結果無法判斷。
3. 菌落彎森pcr是一種快速檢測細菌的方法，可以用於食品安全、環境衛生等領域。
對於檢測結果準確性的要求較高，需要保證實驗操作規範、猜磨樣本質量良好等因素。
4樓：咯辛苦了
1 菌落pcr的三種結果是：陽性、陰性和未檢出。
2 陽性結果顫羨掘表示檢測樣品中存在目標菌株的dna序列，驗證了該樣品中存在目標細菌。
陰性結果表茄核示在樣品中未檢測到目標菌株的dna序列，但不能完全排除存在目標菌株的可能性。
未檢出結果表示樣品中未檢測到目標菌株的dna序列，可以排除樣品中存在目標菌株。
3 菌落pcr技術是一種檢測微生物菌落中存在的目標派物細菌dna序列的方法，可用於食品安全、環境衛生等領域的微生物檢測。
5樓：網友
1 菌落pcr的三種結果是陰性、陽性和可疑陽性。
2 陰性結果表明樣品中沒有目標菌落的dna，即樣品中不存在目標微生物。
陽性結果表示樣品中存在目標菌落的dna，即樣品中存在目標微數首生物。
可疑陽性結果表示樣品中存在目標菌落的dna，但需薯肢數要進行進一步的核酸檢測或培養以確認是否存在目標微生物。
3 菌落pcr技術是一種常用的分子檢測方法，可用於檢測細菌飢蠢或真菌等微生物的存在。
6樓：網友
菌落pcr的三種結果分別是陽性、陰性和無反應。陽性指pcr檢測出某種特定微生物；陰性指pcr檢測沒有檢測出特定微沒拍生物；無反應則消察告指pcr實驗中沒有可檢測的產物，可能是由於模板dna不足或模板dna汙染等拿明原因導致。菌落pcr技術是一種檢測某種微生物的技術，可以檢測出微生物的存在或不存在。
7樓：朵拉探險
菌落pcr（polymerase chain reaction）是一種用於檢測細菌dna特異性序列的分子生物學技術，可以快速、準確地檢測微量細菌的存在。菌落pcr的結果可以分為三類：陽性、陰性和可疑結果。
陽性結果：陽性顫明結果表示樣本中含有檢測目標細菌的dna特異性序列。
陰性結果：陰性結果表示樣本中不茄局告含有檢測目標細菌的dna特異性序列。
可疑結果：可疑結果表示樣本中可能存在檢測目標細菌的dna特異性序列，但是不能確定樣本是否真正含有檢測目標細菌。
菌落pcr技術可以快速準確地檢測微量細菌，並可以得出陽性、陰性和可疑三種結果。每一種臘衫結果都有它的獨特含義，可以為臨床診斷提供參考依據。
8樓：網友
1. 菌落pcr可以得出三種結果：陽性、陰性和未定。
2. 陽性結果表示樣本中存在目轎鎮標細菌的dna，可以用於進一步的鑑定和分析。
陰性結果表閉返粗示樣本中不存在目標菌的世鄭dna，但並不能排除樣本中存在其他菌的可能性。
未定結果表示pcr反應出現問題，需要進行重複實驗或檢查實驗條件。
3. 菌落pcr是一種高靈敏度、高特異性的檢測方法，廣泛應用於食品安全、環境衛生、醫學診斷等領域。
9樓：網友
菌落pcr的結果有三種，分別為：陽性：表示樣本中有需要檢消滾測的特定微生物；陰性：
表示樣本中沒有檢測到特定微生物；不定：表示檢測結果無法確定，可能是由於樣本本身條件不良、樣本不足、培養基條件不完善等襪閉原因告橋裂導致的。
菌落pcr做了10次還是不成功···
10樓：淘歌
按你的實驗體系來看你的mix是2×的吧，同時你的引物應該是5um左右的吧？
重複你的實驗，但做如下改進：
1，挑菌進500ul的ddh2o，充分混勻，不需煮，取1ul做模板，你之前直接挑菌，模板有可能過多，也會p不出帶；（也可以先把轉殖挑到1-5ml的lb中搖菌1小時，直接取1ul來做模板）
2，設陰性對照以及陽性對照（用有目的片段的質粒或菌為模板），如果陽性對照能出來，而你還沒p出來，就說明你的菌裡沒目的片段。
3，你的片段為，如果你用的是普通taq的mix，那麼你的延伸要設90s或100s才夠，退火溫度將梯度設在52-60℃。酶離子就別多加了。
此外，檢查你的平板是不是太長時間了，抗生素失效？會造成質粒丟失，自然p不出來。
11樓：網友
你的菌可能不是陽性的，所以沒有條帶，你最好做酶切，然後**體，最後用藍白斑來篩選。。。
12樓：網友
請問你怎麼就確定目的片段一定連進載體了呢。。。這個體系引物太多了 各足矣。
菌落pcr的具體方法
13樓：洗刷刷
1、菌落pcr混合液（通俗稱為pcr mix）的製備。
taq buffer（10×） 180ul
dntp（ mm） 20～25 ul
primer forward（引物濃度在10pmol） 5 ul
primer reverse（引物濃度在10pmol） 5 ul
ddh2o 720 ul
taq（2u/ul） 12～15 ul
2、常溫下隨機挑選平板內的單一菌落，用滅菌的牙籤或槍頭挑取單一菌落（強調單一，不能是雙轉殖），在lb瓊脂糖平板上輕點，做一拷貝；然後將沾有菌體的牙籤或槍頭置於相應的pcr8聯管中或者96孔pcr反應板中（96孔反應板和挑選的菌落做好記號，如平板上點的是1###……則96空反應板也相應標1###……以便篩選到轉殖後的擴大培養），再將挑取的96個單一菌落轉移到48孔板培養基中培養，挑好單轉殖菌落轉移之後，由於96孔反應板內沾有挑選的菌落，可以用相應的通用引物和之前配製好的pcr混合液混合好之後加入到96孔反應板內。
3、將混有菌體的pcr混合物置於pcr儀中，按常規條件擴增。
4、在擴增出來的反應液中加入溴酚藍或是其他染料，電泳檢測是否得到目的片斷。如有則為陽性轉殖。
5、將已經篩選到的陽性轉殖對應96孔反應板上的菌株挑選出來，37度繼續培養達到一定時間可以抽提質粒，測序驗證是否是需要的目的基因。
注意事項：設計引物很關鍵。一般如果是定向轉殖，用載體上的通用引物即可；如pet系列可用t7通用引物。
如果是非定向轉殖（如單酶切或平末端連線），一條引物用載體，一條引物用目的基因上的，這樣就可以比較方便的鑑定了，而且錯誤概率很低。pcr條件的選擇接近最佳，同時挑取的菌體不宜太多，否則會有非特異性擴增。
使用的引物濃度不能太高，濃度過高會導致非特異性擴增，反應的迴圈數也不能太多，一般不超過25個。同時因為擴增的片段的gc含量問題，有的gc含量很低，有的又很高，導致菌落pcr不容易擴增出目的條帶，在此建議在設定pcr程式時以高gc的溫度為上限，每一迴圈降度左右。
48孔板 96孔反應板。
用革蘭氏陽性菌做菌落pcr時，怎樣處理菌體
14樓：南京金益柏生物科技****
抽出來的模板你可以用好多次。煮沸法模板有效期短，提取的效率也很低下，干擾pcr的雜質也多。就像你pcr失敗一樣，不一定是模板中沒有dna,也可能是雜質干擾的結果。
如果樣本只是乙個菌，或者不是很多，建議少量提取基因組，這樣的模板是不會有問題的。至少，包括我在內我所有見過的做過這個實驗的人都沒有失敗過。
如果樣本很多，非得要煮沸法的話你這樣做：
不要用pcr儀95℃處理，用液體培養基離心獲得菌體，除去培養基，無菌水懸浮，沸水浴30min,迅速-20℃冰凍，化凍後8000rpm離心以沉澱細胞碎片，取2μl上清作為pcr模板。
如果你非要用pcr儀處理，也行，37℃溶菌酶預處理30min.
如果我說的你都不想做，那麼請把你的模板用量減少到2μl（我指的是對於50μlpcr體系來說）,說不定是雜質太多導致你pcr失敗。
菌落pcr的操作步驟及儀器有哪些？
15樓：網友
1.取15-20ul tris-hcl 放到編好號的 的ep管中2.用滅菌牙籤，或槍頭，沾取少量菌體（多了效果不好）3.
並將槍頭或牙籤在剛取出來的tris-hcl中涮一下，可以看到溶液略微變渾濁。
4.蓋上管蓋，100c煮沸5-10min
5.離心，取1-2ul上清配製pcr反應體系。如果菌體較多，則取就夠了。
6.設定pcr儀程式，進行反應。
7.結果電泳檢測即可。
16樓：網友
菌落pcr要菌長的足夠大，一半搖菌儲存，另一半做pcr
菌斑一般用滅菌的槍頭在超淨臺挑取即可，在lb（搖菌用）和pcr反應液裡蘸一下即可。
反應液按正常反應體系加就可以，全程在冰上操作，加完後稍離心，然後設定好pcr儀的反應程式，進行反應。結果跑一下電泳即可。
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