1樓:娘38625謖道
在細菌細胞中,某種特定質粒的數目。根據複製特性,質粒分嚴緊型和鬆弛型兩類,前者在細胞中只含1~2個,而後者含10~15個以上。恆定的拷貝數與質粒複製控制系統、宿主細胞遺傳背景毀瞎及生長條件有關。
質粒複製控制系統首先通過調節複製的起始點來控制拷貝數,調節因素包括阻遏蛋白、反義rna和某些順向重複序列。有些質粒還坦散有其他控制系統,如有分配功能的par系統和確保質粒穩定遺傳的ccd系統。
一旦質粒上與調控有關的基因或位點突變,可使拷貝數明顯增加或減少。southern blot 是一種常用的 dna 定量的分子生物學方法。其原理是將待測的 dna 樣品固定在固相載體(硝酸纖維膜或尼龍膜)上,與標記的核酸探針進行雜交,在與探針有同源序列的固相 dna 的位置上顯示出雜交訊號,通過檢測訊號的有無、強弱可以對樣品定性、定量,從而計算出轉入的拷貝數。
southern 法準確性高、特異性強,但存在費時費力的缺點。另外,由於 southern 法檢測不經過靶片段的擴增( pcr ),一般每個電泳通道需要 10-30 μ g 的 dna ,在實際操作中就需要較大量的植物材料來提取 dna ,而轉基因植物的愈傷組織在無菌條件下經過篩選、重新分化後一般都比較細弱,不宜大量取樣。
如果外源基因在插入時發生基因重組,造成限制性酶切位點丟失, southern 法也無法檢測到。這些因素都制約了 southern 法在 t 0 代轉基因植物中檢測外源基因拷貝數的應用。其定量的基本原理是在 pcr 反應體系中加入非特異性的螢光染料(如:
sybr green i )或特異性的螢光探針(如: taqman 探針),即時檢測螢光量的變化,獲得不同樣品達到一定的螢光訊號(閾值)時所需的迴圈次數: ct 值( cycle threshold );通過將已知濃度標準品的 ct 值與其濃度的對數繪製標準曲線,就可以準確定量樣品的濃度。
螢光定量 pcr 技術具有簡便、快捷的優點,能夠有效擴增低拷貝的靶片段 dna ,對每克樣品中 20pg-10ng 的轉基因成分進行有效檢測。同時,與 southern 法相比,螢光定量 pcr 技術可對 t-dna 的不同序列進行擴增讓餘氏,因此能實現對轉基因品系中的基因重組的檢測( giovanna 2002 )。
單拷貝基因是什麼?
2樓:夏末蔚曳
單拷貝基因指在生物的乙個染色體組中只有乙份拷貝的基因,細胞中的大多數基因都是單拷貝的。
其相對應的概念是冊御辯多拷貝基因,指在基因組中有多份拷貝的基因,如rrna基因,人乙個細胞中約州缺有200個拷貝。trna基因和某些組蛋白基因也是多拆昌拷貝的。
並不是像樓上說的,單拷貝基因這個概念與dna和rna沒有關係。
什麼是單拷貝基因和多拷貝基因
3樓:位承望以蔚
進化過程中,高等生物的基因組。
會發生大量重複。槐改這些重複dna序列有的繼續發生進化歧異,成為與原來序列不同的新基因;有的以結構和功能仍基本相同的形式保留下來成為多拷貝基因。如為rrna和trna編碼的基因就是典型的多拷貝基因。
人的乙個細胞中約有200個rdna拷貝。還有組蛋白基因,免疫球蛋白基因等都是多拷貝基因。重複頻率在10^5次以上(也有人認為是數千次或百萬次以上)的稱為高度重複序列。
有的dna序列,在基因組中並不是只有乙份,還有很多它的複製品,又稱拷貝,它們的序列完全一樣,多存在幾份是為了緩明橡轉錄rna的時候速度快些,因為有些基因表達量大,需要快速的產生很多rna,就叫「多拷貝基因」。
組蛋白基因、免疫球蛋白基因、trna基因、rrna基因屬於多拷貝基因。
人類duf1220的拷貝有212個,而猩猩有37個,猴子只有30個。小鼠和大鼠都為單拷貝。研擾旁究者在很多地方發現這種蛋白,包括腦部神經元。
這說明了某些基因的多拷貝現象與生物進化。
的關係。大多數情況下,結構基因在細菌染色體基因組中都是單拷貝,但是編碼rrna的基因rdna也是多拷貝的,這樣可能有利於核糖體。
的快速組裝。
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