T載體克隆的實驗準備,T載體克隆的試劑配製

2021-04-20 20:50:26 字數 856 閱讀 4977

1樓:手機使用者

清洗,5個100ml錐形

瓶,1個50ml錐形瓶,6副培養皿,3個小試劑瓶,接種環,塗布棒準備專100ml超純水

溶液:lb300ml(液體50ml+50ml,固體100ml),0.1mol/l cacl2 10ml, 100mg/mlamp 1 ml,

20mg/mlx-gal 1 ml, 200mg/ml iptg 1 ml。

大腸桿菌菌液1ml 感受態細胞 連線產物 4管 4 x 5 = 20ul 做4份 目的基因 t載體 t4連線酶 10x衝液 4 x 4ul 4x1ul 4x0.5ul 4x1ul 滅菌:5個100ml錐形瓶(外加1個小的),6副培養皿,3個小試劑瓶,接種環,塗布棒,10ml超純水,lb培養基,1.

5mlep管,大小槍頭,過濾用具2副,,屬0.1mol/l cacl2

t載體克隆的試劑配製

構建質粒表達載體為什麼要先連t載再連pmv261?

2樓:

先連線t載體是為了提高轉化效率

一般來說市面上**的t載體都進行了優化,容易連線片段(也就是效率較高),因此構建表達載體時有時會先連線t載體。同時t載體的測序引物比較明確(商業化的緣故),因此測序也方便一些。更重要的是,t載體往往設計了藍白斑篩選的功能,插入片段的載體會呈現白色,這樣也容易區分驗證,不用每個單菌落都拿去做colony pcr或提質粒酶切驗證。

當然也不是絕對的,我們實驗室就經常直接把片段酶切後連線表達載體,不經過t載體這一步,其實影響並不大。如果你的情況比較特殊(比如片段較大,或是對應的表達載體拷貝數較低等),可以考慮連線t載體,不然的話不是非常必要。

大腸桿菌的分子克隆載體有哪些重要的結構特徵

dn 段的克隆需要合適的載體,載體或是質粒,或是噬菌體,或是病毒,通常大多經過人工改造 地的。作為載體必須具備兩條件 一是該載體在細胞內必須能自主複製,即必須具備複製原點 二是該載體必須具備適合的酶切位點,且這些酶切位點不在複製原點區域內。以上兩條,保證了載體的可繁殖性和可利用性。為了便於獲得陽隆克...

《奇妙的克隆》克隆綿羊多利也是克隆實驗,作者為什麼用

這個部分不光是舉例說明克隆了 這段也包含了克隆的重要意義 具有代表性 對全世界產生了很大的轟動 又標誌著克隆技術的新進展和重大突破。又從中說明克隆技術既可以造福人類,又可以給人類造成危害。因為克隆綿楊多力是世界歷史上在克隆技術是一大創新 你是tyf麼.哇呵呵 八年級上冊17課 奇妙的克隆 關於 多利...

為什麼非要先克隆到中間載體上測序,而不是直接到

為什麼非要先克隆到中間載體上測序 可以不同克隆到載體上。dna測序過程,其實是pcr的過 內程,你只要有足夠容的模板用於pcr反應就行,不一定要克隆到載體上。當然,大多數都是克隆到載體上,因為你需要將待測dna遞交給測序公司,位於載體上的dna可以儲存在細菌中,方便運輸,也方便測序公司進行擴增 培養...