1樓：聽雲者
試想一下，若沒有各種方法來分離組成細胞的不同區室和組分，那麼現代生物學將困難重重。從細胞訊號通路 到新陳代謝，人們一直想知道，它們在哪兒，過去、現在及將來。
賽默飛世爾科技 的市場部經理monica o』hara noonan介紹，研究人員對細胞進行分級分離(fractionate)的原因有很多。他們可能希望，當感興趣的蛋白在某些條件下或某種處理之後轉位時，對其進行追蹤。對細胞進行分級分離能增強低丰度蛋白的檢測能力，或降低下游分析或功能分析的複雜性。
如果您正在從事這一方面的研究，請繼續往下讀。從細胞 上講，我們會幫助您將小麥和穀殼分開。
細胞的組分
如何對細胞進行分級分離取決於很多因素，包括哪些儀器 、知識可以利用，您想要分離什麼，以及這些組分的下游應用是什麼。
離心是細胞分級分離中最常用的技術之一，它們單獨使用，或與其他方法結合。例如，對於高爾基體 或過氧化物酶體，大部分操作都要求高速的密度梯度離心。然而，o』hara noonan也指出，超速離心也有一些缺點，包括超速離心機是**的儀器，有些實驗室無法接觸到。
另外，密度梯度難以傾倒是出了名的，其結果是技術依賴的。
當然，其他的許多組分也可以只利用試劑和臺式儀器來富集。**商開發出一些試劑盒，能方便快捷地帶來高度富集的細胞組分。賽默飛世爾 全新設計的mem-per plus試劑盒，能在一小時之內富集完整的膜相關蛋白。
據sigma-aldrich 的產品專家michael moehlenbrock介紹，這類試劑盒的原理在很大程度上是類似的。它們往往使用低滲緩衝液給細胞膜帶來壓力，然後用等滲的提取緩衝液(帶或不帶還原劑和蛋白酶抑制劑)來維持感興趣的細胞器。有時也需要機械裂解或去汙劑裂解。
「各個不同**商在細胞分級分離試劑盒的設計上都是一致的，而不同細胞組分的差異在於緩衝液組成、裂解試劑和離心速度，」moehlenbrock說。
此類試劑盒的價值並不在於某些祕密試劑，而在於qc系統的一致性和重複性。「細胞分級分離的方法已經過充分鑑定，其操作步驟適用於大部分應用，」moehlenbrock說。「商業化試劑盒為終端使用者帶來了簡便和效率，同時提供了品質保證的安全性。
」通過改變穿插在離心步驟之間的緩衝液的去汙劑組分，研究人員可分離不止一個組分。例如，市場上許多試劑盒可收集細胞核和胞漿蛋白。其他試劑盒也帶來了三個或四個不同的組分。
cell signaling technology的cell fractionation kit產生了細胞質、細胞膜/細胞器以及細胞核/細胞骨架組分，而qiagen的qproteome cell ***partment kit分離出細胞質、細胞膜、細胞核和細胞骨架組分。
美天旎提供一種不含去汙劑的試劑盒，它利用tom22抗體標記的磁珠來特異分離線粒體。據該公司的技術支援介紹，他們不提供其他亞細胞組分的產品，但客戶可以利用自己的抗體來間接分離其他組分。
同樣地，賽默飛世爾的cell su***ce protein isolation kit標記細胞表面蛋白的外部賴氨酸，它具有一個可切割的生物素衍生物，讓此蛋白組分在細胞裂解後可**獲。
其中有什麼
在細胞組分被分離出來之後，必須驗證您的實驗，並確認這些組分確實包含了您要分離的。儘管這些試劑盒通常不包含區分各種組分的試劑，但許多會指出不同的看家基因，讓您用來確保質量。moehlenbrock表示：
「在某些情況下，我們會提供分析的建議。」例如，sigma-aldrich mitochondria isolation kit的技術指南建議檢查細胞色素c氧化酶活性和檸檬酸合酶活性，以確認外膜和內膜的完整性。
cell signaling technology也提供cell fractionation antibody sampler kit，作為分級分離試劑盒的伴隨產品。生產科學家jim cormier介紹，當您在執行western時，您會得到一個量化值，哪些組分佔多少。sampler kit包含細胞質mek1/2、線粒體凋亡誘導因子(aif)、組蛋白h3和細胞骨架波形蛋白的兔單克隆抗體，以及山羊抗兔igg。
研究人員也可利用試劑盒中的建議，或搜尋文獻，組裝自己的western blot或elisa試劑盒。不過cormier也提醒，並非每個抗體都有著它應有的特異性。
下游的分析
與超速離心相比，基於試劑盒的細胞分級分離方法快速又方便，也適合多個下游應用，如emsa、報告基因分析、酶活分析和western blot。
然而，製備過程中所使用的去汙劑和鹽可能阻礙蛋白質組學的應用，如質譜，「這有時取決於去汙劑的量，去除的容易程度，以及是否用於功能分析，」o』hara noonan說。「在某些情況下，您可能需要透析或脫鹽。」
同樣地，有時可能需要額外的步驟，來增加產物的純度。在讀研究生時，moehlenbrock一般使用臺式離心機來製備線粒體。「有時我會用11,000 x g來去除細胞碎片。
之後獲得線粒體提取物，並用蔗糖梯度和超速離心機來進一步純化。這取決於您想做什麼，
細胞組分的分離與分析有哪些基本的實驗技術
2樓：匿名使用者
超濾、密度梯度離心、質量梯度離心、細胞破碎是分離技術.
分析技術要看物質而定.
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